革蘭氏染色是細菌鑒定上重要和廣泛應用的方法。根據(jù)此法染色結果可將細菌分成兩大類。一類細菌能夠保留初染色劑（結晶等）于細胞中，不受脫色劑（酒精）的影響，而zui后細菌被染成紫色或深藍色者稱為革蘭氏陽性（Gram-positive）；另一類細菌可因脫色劑的作用而洗出結晶紫，然后被另一染色劑（藏紅花）染成紅色，稱為革蘭氏陰性（Gram-negative）。也有一些菌種革蘭氏染色是可變的。

【實驗目的】

了解革蘭氏染色的原理，并掌握革蘭氏染色法的操作技術。

【實驗原理】

革蘭氏染色法是細菌學中廣泛使用的一種重要的鑒別染色法。1884年由丹麥醫(yī)師Gram創(chuàng)立。

細菌先經(jīng)堿性染料結晶紫染色，再經(jīng)碘液媒染（以增加染料與細胞的親和力）后，用酒精或丙酮脫色，再用復染色劑染色。不被脫色而保持原顏色者為革蘭紙陽性菌（G+）；被脫色后又被染上復染劑的顏色者為革蘭氏陽性菌（G-）。此法可將細菌分為兩大類。

革蘭氏染色的機理主要是利用兩類細菌的細胞壁成分和結構不同。革蘭氏陰性菌的細胞壁中含有較多的類脂質，而肽聚糖的含量較少。當用乙醇或丙酮脫色時，類脂質被溶解，增加了細胞壁的通透性，使初染后的結晶紫和碘的復合物易于滲出，結果細胞被脫色，經(jīng)復染后，又染上復染液的顏色；而革蘭氏陽性菌細胞壁中肽聚糖的含量多且交聯(lián)度大，類脂質含量少，經(jīng)乙醇或丙酮洗脫后，肽聚糖層的孔徑變小，通透性降低，因此，細胞仍保留初染時的顏色。

【實驗材料、藥品及器具】

1、菌種   大腸桿菌（Escherichia coli）

枯草芽孢桿菌（Bacillus Subtilis）

*（Staphylococeus auresu）

2、染液   草酸銨結晶紫液

          革蘭氏碘液

          95%的酒精

          藏花紅液

3、器皿洗凈的載玻片6片、顯微鏡、酒精燈、接種環(huán)、香柏油、二甲苯、擦鏡紙、吸水紙、鑷子、玻璃缸、瓶裝蒸餾水

【實驗步驟】

1、取培養(yǎng)12-24h的大腸桿菌、枯草芽孢桿菌和*分別涂片、固定。

2、加草酸銨結晶紫染色劑一滴，染色1分鐘。

3、傾去染液并用洗瓶裝水輕輕沖洗。

4、加碘液染1分鐘，水洗，然后用吸水紙吸干。

5、將載玻片略傾斜，滴加95%酒精脫色（洗至流下的酒精中無紫色時為止），然后水洗。

6、加藏花紅復染，染色30分鐘，水洗，用吸水紙吸干或烘干。

7、用油鏡鏡檢觀察。