亚洲精品中文视频,在线观看aaa,丁香五月欧美成人,亚洲成人高清,成人免费观看视频在线观看,在线日韩中文,成人av免费播放

上海士鋒生物科技有限公司
中級會員 | 第14年

13127537090

標準品
培養(yǎng)基
培養(yǎng)基原料 霍亂弧菌診斷血清 大腸艾希氏菌診斷血清 志賀氏菌屬診斷血清 沙門氏菌屬診斷血清 標準血清,診斷血清 抗生素藥敏紙片 微生物配套試劑 微生物生化管 管裝培養(yǎng)基 即用型液體培養(yǎng)基 一次性培養(yǎng)基平板 顯色培養(yǎng)基 臨床培養(yǎng)基 菌種保存培養(yǎng)基 四環(huán)素檢定、厭氧亞硫酸鹽還原桿菌檢測培養(yǎng)基 維生素檢測培養(yǎng)基 一次性衛(wèi)生用品衛(wèi)生檢測培養(yǎng)基 罐頭食品商業(yè)無菌檢測培養(yǎng)基 飲用水及水源檢測培養(yǎng)基 藥品、生物制品檢測培養(yǎng)基 化妝品檢測培養(yǎng)基 動物細胞培養(yǎng)基 啤酒檢驗培養(yǎng)基 軍團菌檢測培養(yǎng)基 支原體檢測培養(yǎng)基 小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌檢驗培養(yǎng)基 彎曲桿菌檢驗培養(yǎng)基 產(chǎn)氣莢膜梭菌、肉毒梭菌、厭氧菌檢驗培養(yǎng)基 阪崎腸桿菌檢驗培養(yǎng)基 溶血性鏈球菌檢測培養(yǎng)基 李斯特氏菌檢測培養(yǎng)基 弧菌檢測培養(yǎng)基 乳酸菌、雙歧桿菌檢測培養(yǎng)基 酵母、霉菌檢測培養(yǎng)基 檢測培養(yǎng)基 沙門氏菌、志賀氏菌檢驗培養(yǎng)基 大腸菌群、糞大腸菌群、大腸桿菌及腸桿菌科檢測培養(yǎng)基 細菌總數(shù)檢測,增菌培養(yǎng)基
抗體
生物試劑
細胞
菌株
血清
細胞分離試劑
試劑盒

兔肝RNA的制備及測定

時間:2015-11-10閱讀:735
分享:

實驗?zāi)康模?br>學習從兔肝中提取RNA的方法。
通過地衣酚顯色法測定RNA的含量。

實驗原理:
細胞內(nèi)大部份RNA均與蛋白質(zhì)結(jié)合在一起,并且多以核蛋白的形式存在。因此,分離制備RNA時,首先遇到的是必須使RNA與蛋白解離,并除去蛋白質(zhì)。由于RNA的種類來源和存在形式不同,所用的制備方法各異,一般常用的方法有,鹽酸胍法,去污劑法和法。其中,以法使用較為廣泛。產(chǎn)品純度高,適合小規(guī)模生產(chǎn)。
動物組織中以肝臟器官RNA含量較為豐富。經(jīng)組織勻漿用處理并離心后RNA溶于上層被酚飽和的水相中,DNA和蛋白質(zhì)則留在酚層中,向水層中加入乙醇后,RNA即以白色絮狀沉淀析出。此法能較好的除去DNA和蛋白質(zhì)。上述方法提取的的RNA具有生物活性。工業(yè)上常用稀堿法和濃鹽法提取RNA;其工藝簡單,所提取的核酸均為變性RNA,只能用作制備核苷酸原料。本實驗就是將兔肝組織,在酚與十二烷基硫酸鈉的存在下,RNA與蛋白質(zhì)分離使蛋白質(zhì)變性凝固。RNA溶解在水相中,用乙醇使RNA從水相中沉淀,達到分離。
RNA含量的測定,除了可用紫外吸收法及定磷法外,常用地衣酚法測定,其反應(yīng)原理是當RNA與濃鹽酸共熱時,即發(fā)生降解,形成的核糖繼而轉(zhuǎn)變成糠醛,后者與3, 5-二羥甲苯(地衣酚orcinol)反應(yīng),在Fe3+或Cu2+催化下,生成鮮綠色的復(fù)合物.反應(yīng)產(chǎn)物在670nm處有zui大吸收。RNA在20-250微克范圍內(nèi),光吸收與RNA濃度 成正比。地衣酚反應(yīng)特異性較差,凡是戊糖均有此反應(yīng)。DNA和其他雜質(zhì)也能給出類似的顏色。

實驗試劑
0.05mol/L醋酸緩沖液(PH5.0)
0.05mol/L醋酸鈉35毫升, 0.2mol/L醋酸15毫升,加蒸餾水至1000毫升,混合后測PH5.0
25%SDS:稱取SDS25克,溶于50%乙醇中至100毫升,室溫存放。
80%酚:取80份,加蒸餾水20份,混勻后裝棕色瓶中。
2mol/L醋酸鈉:取無水醋酸鈉16。4克,用蒸餾水溶解后配成100毫升
95%乙醇

操作步驟
RNA提?。簩⑿迈r兔肝浸入預(yù)冷0度0.05mol/L醋酸鈉緩沖液(PH5.0)中,除去肝臟處的結(jié)締組織,除去血凝,用濾紙吸干,稱取0.9克.
取0.9克肝臟,加入 0.05mol/L醋酸緩沖液(PH5.0)9毫升,250克/升.SDS1.5毫升,移入勻漿管中,勻漿后再加入等體積80%酚,再勻漿一次.
移入三角瓶中,置65度水浴中繼續(xù)振搖5-8分,取出流水冷卻.

離心,3000轉(zhuǎn)/分,10-15分,上層為稍混濁,含有RNA的水相,中層為變性蛋白,下層為酚液,管底殘渣,含有RNA.吸出上層水溶液要RNA的收獲量,可向中下層液中再加1/2體積的醋酸緩沖液,同樣在65度水浴中振搖提取一次,離心后所收得的上層水液,可與上述水液合并,本次實驗只提取一次.
用量筒測水液的量,加入1/10體積的2mol/L醋酸鈉混勻.再加入2.5倍體積預(yù)冷的95%乙醇混勻,冷卻放置絮狀沉淀充分形成.

離心3000轉(zhuǎn)/分,10分鐘,傾出上清(不要廢棄,可倒入收集瓶,作蒸餾回收乙醇用.
沉淀用蒸餾水4毫升溶解,慢慢向沉淀中加入蒸餾水,不斷攪拌,至沉淀*溶解即可,待作含量測定.

提取過程


RNA含量測定 
標準曲線制作:取試管12只,按下表編號加入試劑,加畢,搖勻,沸水浴中加熱25分鐘,取出后冷水冷卻,測定各管0D670為縱坐標,RNA濃度為橫坐標作圖

測定過程

管號/試劑ml
0

1

2

3

4

5

6

7

RNA標準液

0

0.4

0.8

1.2

1.6

2.0


蒸餾水

2.0

1.6

1.2

0.8

0.4

0


地衣酚試劑

2.0

2.0

2.0

2.0

2.0

2.0



取兩支試管各加入0.2ml待測液,再加1.8ml水和2.0ml地衣酚試劑,加畢,搖勻,沸水加熱25分鐘,取出后冷水冷卻,測定各管OD680為縱坐標,RNA濃度為橫坐標作圖并計算提出的RNA 的量。并計算出RNA的收率.

會員登錄

×

請輸入賬號

請輸入密碼

=

請輸驗證碼

收藏該商鋪

X
該信息已收藏!
標簽:
保存成功

(空格分隔,最多3個,單個標簽最多10個字符)

常用:

提示

X
您的留言已提交成功!我們將在第一時間回復(fù)您~
撥打電話
在線留言