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上海士鋒生物科技有限公司
中級(jí)會(huì)員 | 第14年

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標(biāo)準(zhǔn)品
培養(yǎng)基
培養(yǎng)基原料 霍亂弧菌診斷血清 大腸艾希氏菌診斷血清 志賀氏菌屬診斷血清 沙門(mén)氏菌屬診斷血清 標(biāo)準(zhǔn)血清,診斷血清 抗生素藥敏紙片 微生物配套試劑 微生物生化管 管裝培養(yǎng)基 即用型液體培養(yǎng)基 一次性培養(yǎng)基平板 顯色培養(yǎng)基 臨床培養(yǎng)基 菌種保存培養(yǎng)基 四環(huán)素檢定、厭氧亞硫酸鹽還原桿菌檢測(cè)培養(yǎng)基 維生素檢測(cè)培養(yǎng)基 一次性衛(wèi)生用品衛(wèi)生檢測(cè)培養(yǎng)基 罐頭食品商業(yè)無(wú)菌檢測(cè)培養(yǎng)基 飲用水及水源檢測(cè)培養(yǎng)基 藥品、生物制品檢測(cè)培養(yǎng)基 化妝品檢測(cè)培養(yǎng)基 動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)基 啤酒檢驗(yàn)培養(yǎng)基 軍團(tuán)菌檢測(cè)培養(yǎng)基 支原體檢測(cè)培養(yǎng)基 小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌檢驗(yàn)培養(yǎng)基 彎曲桿菌檢驗(yàn)培養(yǎng)基 產(chǎn)氣莢膜梭菌、肉毒梭菌、厭氧菌檢驗(yàn)培養(yǎng)基 阪崎腸桿菌檢驗(yàn)培養(yǎng)基 溶血性鏈球菌檢測(cè)培養(yǎng)基 李斯特氏菌檢測(cè)培養(yǎng)基 弧菌檢測(cè)培養(yǎng)基 乳酸菌、雙歧桿菌檢測(cè)培養(yǎng)基 酵母、霉菌檢測(cè)培養(yǎng)基 檢測(cè)培養(yǎng)基 沙門(mén)氏菌、志賀氏菌檢驗(yàn)培養(yǎng)基 大腸菌群、糞大腸菌群、大腸桿菌及腸桿菌科檢測(cè)培養(yǎng)基 細(xì)菌總數(shù)檢測(cè),增菌培養(yǎng)基
抗體
生物試劑
細(xì)胞
菌株
血清
細(xì)胞分離試劑
試劑盒

DNA的限制性內(nèi)切酶酶切

時(shí)間:2015-10-12閱讀:1275
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實(shí)驗(yàn)?zāi)康?nbsp;
1. 學(xué)會(huì)DNA限制性內(nèi)切酶酶切技術(shù)。 
2. 瓊脂糖凝膠電泳法觀察酶切DNA的結(jié)果。 

實(shí)驗(yàn)原理 
質(zhì)粒pUC118上有限制性內(nèi)切酶BamHI的識(shí)別序列G↓GATCC,用BamHI酶切后形成線性質(zhì)粒dna。瓊脂糖凝膠電泳可以按酶切產(chǎn)物分子量的大小分離DNA片段,小片段比大片段遷移快,凝膠上遷移的距離與分子量的對(duì)數(shù)成反比。要準(zhǔn)確地確定DNA片段的大小,必須用分子量標(biāo)準(zhǔn)物同時(shí)進(jìn)行電泳對(duì)照。常用的分子量標(biāo)準(zhǔn)是lDNA/EcoRI、lDNA/HindIII、lDNA/EcoRI+HindIII的酶切片段
DNA的限制性內(nèi)切酶酶切
DNA的限制性內(nèi)切酶酶切
實(shí)驗(yàn)材料和試劑 
(一)實(shí)驗(yàn)材料 
實(shí)驗(yàn)二提取的質(zhì)粒pUC118??? 
(二)試劑 
1.限制性內(nèi)切酶BamHI 
2.l DNA/HindIII分子量標(biāo)準(zhǔn) 
3.雙蒸餾無(wú)菌水 
4.溴酚藍(lán)指示劑點(diǎn)樣緩沖液 
5.1mg/ml溴化乙錠溶液 
6.電泳緩沖液(TAE) 
7.0.7% 瓊脂糖凝膠(用TAE電泳緩沖液配制) 

(三)器材 
1.5ml Eppendorf管 200ml吸頭 
(四)儀器 
微量移液器 離心機(jī) 
恒溫水浴鍋 電泳儀 
水平電泳槽 透射紫外觀察儀

實(shí)驗(yàn)步驟 
1. 取一個(gè)滅菌的Eppendorf管,依次加入下列試劑: 
雙蒸餾無(wú)菌水 12ml 
10×BamHI緩沖液 2ml 
質(zhì)粒pUC118 5ml 

BamHI 1ml 
總體積 20ml 
2. 用手指輕彈管壁,使各種試劑混勻,快速離心,以集中溶液。 
3. 置37℃水浴60~120 分鐘。 
4. 加入5ml溴酚藍(lán)指示劑點(diǎn)樣緩沖液,按實(shí)驗(yàn)三方法電泳,觀察酶切反應(yīng)結(jié)果,鑒定酶切效果。

【提示】
實(shí)驗(yàn)操作中注意的問(wèn)題
1. 酶切反應(yīng)用的Eppendorf管和吸頭,都要用新的,用雙蒸餾水洗凈,滅菌。使用前打開(kāi)包裝,用鑷子夾取,不要直接用手去拿,以防手上的雜酶污染。
2.DNA樣品和限制性內(nèi)切酶的用量都極少,必須嚴(yán)格注意吸樣量的準(zhǔn)確性及全部放入反應(yīng)體系中。
3.要注意酶切加樣的次序,一般次序?yàn)殡p蒸餾無(wú)菌水、緩沖液、DNA各項(xiàng)試劑,zui后才加酶。
4.取酶時(shí),吸頭要從酶液的表面吸取,以防止吸頭沾上過(guò)多的酶液。待用的酶要放在冰浴內(nèi),用后蓋緊蓋子,立即放回-20℃冰箱中,防止酶失活。
5.當(dāng)樣品在37℃保溫時(shí),要將Eppendorf管的蓋子蓋緊,防止因蓋子未蓋嚴(yán)密使水進(jìn)入管內(nèi),造成實(shí)驗(yàn)失敗。

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