1.吸附劑的選擇及處理
吸附劑分為無(wú)機(jī)吸附劑如硅膠、氧化鋁、活性炭、氧化鎂、碳酸鈣、磷酸鈣，有機(jī)吸附劑如纖維素、淀粉、蔗糖、聚酰胺等。一般來(lái)說(shuō)，所選擇吸附劑應(yīng)有較大的比表面積和足夠的吸附能力：對(duì)欲分離的不同物質(zhì)應(yīng)有不同的吸附能力，即有足夠的分辨力；與洗脫劑、溶劑及樣品組分不會(huì)發(fā)生化學(xué)反應(yīng)；吸附劑顆粒均勻。 吸附劑一般先經(jīng)過(guò)篩獲得均勻的顆粒（100-200目），對(duì)含有雜質(zhì)的吸附劑可用有機(jī)溶劑如甲醇、乙醇、乙酸乙酯等浸泡處理或提取除去，有些吸附劑可用沸水洗去酸堿使呈中性，有些需經(jīng)加熱處理活化。

2. 溶劑與洗脫劑
兩者常為同一組分,但用途不同。習(xí)慣上把用于溶解樣品的溶液稱為溶劑，把用于洗脫洗脫柱的溶液稱洗脫劑。原則上所選的溶劑和洗脫劑要求純度高，與樣品和吸附劑不起化學(xué)反應(yīng)，對(duì)樣品的溶解度大，粘度小，易流動(dòng)，易與洗脫的組分分開(kāi)。常用的溶劑和洗脫劑有飽和碳?xì)浠衔铩⒋?、酚、醚、鹵化烷、有機(jī)酸等。

3.柱的裝填和樣品的加入
色譜柱一般為玻璃或有機(jī)玻璃管制成，柱下端裝上一塊2-4號(hào)燒結(jié)玻璃或墊一層玻璃絲以支持吸附劑，管內(nèi)裝吸附劑。有條件可附加壓或減壓裝置，使流速保持恒定，色譜柱外也可配恒溫管套。
裝柱的方法通常是將一種在適當(dāng)溶劑中的吸附劑調(diào)成糊狀，慢慢地倒入關(guān)閉了出水口的柱中，同時(shí)不斷攪拌上層糊狀物，趕去氣泡，并使裝填物均勻的自然下降，裝置所需要的高度后，打開(kāi)出水口，讓溶劑流出。注意柱的任何部分不能流干，即是說(shuō)、再柱的表面始終保持著一層溶劑。
小心地用移液管把樣品液繞柱內(nèi)壁小心地加入，不要沖擊著吸附劑的表面。加樣的另一個(gè)辦法是用一個(gè)注射器和蠕動(dòng)泵把樣品直接送到柱表面上。

4. 洗脫
在整個(gè)洗脫過(guò)程中，要使洗脫液通過(guò)柱時(shí)保持恒定的流速，可以用調(diào)節(jié)"操作壓"來(lái)調(diào)控（操作壓相當(dāng)于在柱上面的貯液瓶中溶劑的水平和柱出口位置的水平之差）。另一個(gè)方法是時(shí)用蠕動(dòng)泵。
洗脫過(guò)程中柱內(nèi)不斷發(fā)生溶解（解吸），吸附，在溶解，在吸附。被吸附的物質(zhì)被溶劑解吸，隨著溶劑向下移動(dòng)，又遇到新的吸附劑又把該物質(zhì)自溶劑中吸附出來(lái)，后來(lái)流下的新溶劑又在使該物質(zhì)溶解而向下移動(dòng)。如此反復(fù)解析，吸附，經(jīng)過(guò)一段時(shí)間后，該物質(zhì)向下移動(dòng)至一定距離，此距離的長(zhǎng)短與吸附劑對(duì)該物質(zhì)的吸附力及溶劑對(duì)該物質(zhì)的溶解能力有關(guān)，分子結(jié)構(gòu)不同的物質(zhì)溶解度和吸附能力不同，移動(dòng)距離也不同,吸附較弱的就易溶解，移動(dòng)距離較大。經(jīng)過(guò)適當(dāng)時(shí)間后，各物質(zhì)就形成了各種區(qū)帶,，每一區(qū)帶可能是一種純物質(zhì)，如果被分離物質(zhì)是有色的，就可以清楚地看到色層。隨著洗脫劑向下移動(dòng)，zui后各組份按吸附力的不同順序流出色譜柱，以流出體積對(duì)濃度作圖，可得由一系列峰組成的曲線，每一峰可能相當(dāng)于一個(gè)組分。