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上海莼試生物技術(shù)有限公司

主營(yíng)產(chǎn)品: ELISA試劑盒,ELISA試劑盒價(jià)格,ELISA試劑盒報(bào)價(jià)

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鮑球狀病毒PCR試劑盒使用方法

2020-1-20  閱讀(319)

鮑球狀病毒PCR試劑盒使用方法:

一、樣品 DNA 的制備

1. 用自選方法純化樣品的 DNA,本產(chǎn)品跟市場(chǎng)上絕大多數(shù)核酸純化產(chǎn)品兼容。

2. 如果有 N 個(gè)樣品,則需要進(jìn)行 N+2 個(gè)樣品提取,多出的一個(gè)用作樣品制備陽(yáng)性對(duì)照管、另一個(gè)用作樣品制備陰性對(duì)照管。如果用本試劑盒自帶的DNA 釋放劑試用裝。則按下面步驟操作:

3. 配制溶液 A 工作液。以配制 1mL 工作液(足夠 10 個(gè)樣品)為例:在一干凈塑料管中加入 10uL 溶液 A 成分一,20uL 溶液 A 成分二和 970uL 超純水,充分混合均勻即可。溶液 A 工作液可室溫放置,但在一周內(nèi)用完,不要放置。一次檢測(cè)一個(gè)樣品需要 100uL 溶液 A 工作液,1mL 工作液足夠 10 個(gè)樣品。如果待測(cè)樣品數(shù)量為其他數(shù)字,配制的溶液 A 工作液的體積需要做相應(yīng)的調(diào)整。

4. 在標(biāo)記好的 N+2 個(gè)離心管中,加入 1-5mg 固體樣品(半粒芝麻大?。┗?5uL 液體樣品待測(cè)樣品。在樣品制備陽(yáng)性對(duì)照中加入 5uL 陽(yáng)性對(duì)照,在樣品制備陰性對(duì)照中加入 5uL 水。

5. 在每個(gè)管中加入 100 uL 溶液 A 工作液,確保固體樣品被溶液淹埋,如果是液體樣品則震蕩混勻。

6. 95℃保溫 10 分鐘。

7. 待冷卻到常溫后加入 10uL 溶液 B 并混勻得 DNA 釋放液。每個(gè)樣品得到的 DNA釋放液足夠進(jìn)行 50-100 次 PCR。

二、鮑球狀病毒PCR試劑盒 設(shè)置 PCR 反應(yīng)(40 uL 體系) 

8. 在 N+2 個(gè) PCR 管中加入下列成分,下面以樣品數(shù)為 1 舉例(注意:如果一次使用DNA 釋放劑,每個(gè)樣品設(shè)置兩個(gè)模板用量的 PCR 反應(yīng),兩個(gè)反應(yīng)的模板使用量差 10 倍,由此確定用量,以后就用效果好的那個(gè)模板用量):

成份

樣品(用量1)

樣品(用量2)

陽(yáng)性對(duì)照

陰性對(duì)照

即用型 PCR Mix 3.0

20 uL

20 uL

20 uL

20 uL

源性 PCR 引物混合液

2 uL

2 uL

2 uL

2 uL

制備的樣品

18 uL

2 uL

樣品制備陽(yáng)性對(duì)照

不加

不加

2 uL

不加

樣品制備陰性對(duì)照

不加

不加

不加

2 uL

超純水

不加

16 uL

16 uL

16 uL

9. 輕柔混勻后上機(jī),按下面參數(shù)進(jìn)行 PCR。

過程

溫度

時(shí)間

預(yù)變性

94℃

10分鐘

PCR 反應(yīng)

(35 個(gè)循環(huán))

94℃

30s

60℃

30s

72℃

30s

延伸

72℃

7分

10. 電泳檢測(cè) PCR 產(chǎn)物。預(yù)期的 PCR 產(chǎn)物長(zhǎng)度為 216bp。陽(yáng)性對(duì)照必須有此條帶出

現(xiàn),陰性對(duì)照必須無任何擴(kuò)增,否則實(shí)驗(yàn)無效。對(duì)沒有擴(kuò)增產(chǎn)物的樣品,需要用通用引物(如真核生物專一 PCR 引物,需自備)測(cè)試是否有抑制劑或樣品是否濃度達(dá)到 PCR 的要求,如果通用引物也擴(kuò)不出來,需要濃縮并再次純化 DNA 樣品,或者更換 DNA 提取方法,直到通用引物能夠擴(kuò)增出預(yù)計(jì)大小的片段。



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