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小鼠巨噬細胞Ana-1細胞

時間:2017/8/29閱讀:1605
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小鼠巨噬細胞Ana-1細胞
生長特性: 懸浮生長   
培養(yǎng)條件 :RPMI 1640 (w/o Hepes)  胎牛血清,10%
傳代方法:1:2。3天內(nèi)可長滿。
傳代情況 :PN
凍存條件:基礎培養(yǎng)基+8%DMSO+20%FBS

小鼠巨噬細胞Ana-1細胞細胞復蘇:
1、打開水浴鍋, 預熱到37度
2、從液氮罐中出凍存的細胞,迅速放入37度水浴鍋快速溶解
3、在超凈臺中,把溶解的細胞移入離心管,(離心管內(nèi)先加入2ML左右的培養(yǎng)基).1000RPM 離心5分鐘
4、棄上清,加入1ML培養(yǎng)基,吹打均勻,移入培養(yǎng)瓶內(nèi),(培養(yǎng)瓶內(nèi)先加入4-5ML培養(yǎng)基),37度過5%CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)
5、第二天,用新鮮的培養(yǎng)基給細胞換液后繼續(xù)培養(yǎng)。

小鼠巨噬細胞Ana-1細胞細胞傳代:
1、當細胞融合度達到90%以上時,給細胞傳代;
2、37°C水浴預熱培養(yǎng)基;
3、在超凈臺中,棄培養(yǎng)基,加入2-5mlPBS清洗細胞后,再加入1ml胰酶消化細胞;
4、顯微鏡下觀察到細胞變圓,有細胞開始脫離瓶壁時,加入5ml培養(yǎng)基終止消化;
5、用移液器輕輕吹下瓶壁上剩余的細胞,并輕輕吹打?qū)⒓毎瞪ⅲ?br />6、將細胞移入離心管中,1000rpm離心5min;
7、棄上清,加入15-20ml的培養(yǎng)基(含血清)重懸細胞后轉(zhuǎn)入T75培養(yǎng)瓶中或按適當比例傳到T25瓶中(確保細胞貼壁后融合度在25-50%之間),細胞密度在1×104 cells/cm2 (2.5×105 cells/T-25瓶),混勻細胞懸液,確保細胞均勻分布;
8、將培養(yǎng)瓶置于37°C,5% CO2的無菌培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

細胞凍存:
1、將細胞消化下來,移入離心管離心,棄上清
2、準備凍存液比例:50%FBS+40%培養(yǎng)基+10%DMSO(現(xiàn)用現(xiàn)配) 或95%FBS+5%DMSO(現(xiàn)用現(xiàn)配)
3、加1.5毫升凍存液在離心管中,將細胞吹打均勻,移入凍存管內(nèi).
凍存時間。放入4度冰箱10分鐘.  放入-20度冰箱1-3小時后.再放入-80度冰箱過夜,第二天放入液氮罐保存
4、原則:慢凍速溶
5、加1.5毫升凍存液在離心管中,將細胞吹打均勻,移入凍存管內(nèi)。

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