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一、大鼠谷氨酸半胱氨酸連接酶催化亞基(GCLC)ELISA試劑盒操作步驟
各試劑在使用前平衡至室溫。
1. 加樣：分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔。除空白孔外，余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)溶液或待測(cè)樣品100ul，注意不要有氣泡，輕輕混勻，酶標(biāo)板加上蓋，37℃反應(yīng)120分鐘。
2. 棄去液體，甩干，不用洗滌。
3. 每孔加檢測(cè)溶液A工作液 100ul，37℃,60分鐘。洗板3次，350ul/每孔，甩干。
4. 每孔加檢測(cè)溶液B工作液 100ul，37℃，60分鐘，洗板5次，甩干。
5. 依序每孔加底物溶液90ul，37℃避光顯色30分鐘(此時(shí)肉眼可見標(biāo)準(zhǔn)品的前3-4孔有明顯的梯度蘭色，后3-4孔梯度不明顯)。
6. 依序每孔加終止溶液50ul，終止反應(yīng)(此時(shí)蘭色立轉(zhuǎn)黃色)。用酶聯(lián)儀在450nm波長依序測(cè)量各孔的光密度(OD值)。
二、大鼠谷氨酸半胱氨酸連接酶催化亞基(GCLC)ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)操作注意事項(xiàng)
☆試劑準(zhǔn)備：所有試劑都必須在使用前達(dá)到室溫，使用后請(qǐng)立即按照說明書要求保存。實(shí)驗(yàn)操作中必須使用一次性吸頭，避免交叉污染。
☆加樣：加樣時(shí)，要控制加樣速度，避免*孔與zui后一孔之見的時(shí)間間隔過大，否則將會(huì)導(dǎo)致不同的預(yù)孵育時(shí)間，從而影響實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性以及重復(fù)性；一般加樣時(shí)間控制在10分鐘內(nèi)，如果樣本數(shù)量過多，可使用多道移液器。
☆孵育：樣品要在密閉的容器內(nèi)進(jìn)行孵育，嚴(yán)格按照說明書上規(guī)定的孵育時(shí)間和溫度進(jìn)行。
☆洗滌：洗滌過程中反應(yīng)孔中的殘留的洗滌液應(yīng)在濾紙上充分拍干，同時(shí)要消除板底殘留的液體和手指痕跡，避免影響zui后的酶標(biāo)儀讀數(shù)。
☆反應(yīng)時(shí)間的控制：加入底物后請(qǐng)定時(shí)觀察反應(yīng)孔的顏色變化(比如，10分鐘左右)，如果顏色較深，請(qǐng)?zhí)崆凹尤虢K止液終止反應(yīng)。
☆建議實(shí)驗(yàn)前預(yù)測(cè)樣品含量，如樣品濃度過高，應(yīng)對(duì)樣品進(jìn)行稀釋，計(jì)算結(jié)果時(shí)乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。
☆建議使用本試劑盒時(shí)先做預(yù)實(shí)驗(yàn)(即先做標(biāo)準(zhǔn)曲線，試用幾個(gè)標(biāo)本)，如果對(duì)本試劑盒有任何疑問，可和所購經(jīng)銷商，如果因運(yùn)輸過程導(dǎo)致試劑盒失效，可要求調(diào)換，但概不承擔(dān)產(chǎn)品本身以外的任何損失。

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