細胞/組織高質(zhì)純化溶酶體分離試劑盒

【資料簡介】

主要用途

細胞/組織高質(zhì)純化溶酶體（lysosome）分離試劑是一種旨在從動物細胞或組織中分離出活性完整而高度純化的溶酶體細胞器的而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心研制、成功實驗證明的。適合于動物軟組織（肝或腦組織）和培養(yǎng)細胞的溶酶體的制備。產(chǎn)品不含污染性蛋白酶和核酶，即到即用，性能穩(wěn)定，分離產(chǎn)量和純度俱佳。

技術(shù)背景

溶酶體（lysosome）是一種普遍存在于真核細胞中的細胞器，含有酸性水解酶，例如酯酶、淀粉酶、蛋白酶、核酶等，分解各種細胞殘渣和廢棄物質(zhì)，包括過多的或破損的其它細胞器、食物顆粒、吞噬的細菌和病毒等。其大小為0.5至1.5微米，球圓形，溶酶體內(nèi)pH為5.0左右。溶酶體功能異常會引起溶酶體貯積癥（1ysosomal storage disorders；LSDs），例如家族性

病（Tay-sachs disease）和龐貝氏癥 （Pompe’s disease）。溶酶體細胞器的分離是現(xiàn)代細胞生物學研究的zui常用的手段之一。從任何組織或細胞分離溶酶體的技術(shù)方法基本上采用：*，通過機械或化學方法破裂細胞；第二，通過低速差速離心去除殘渣碎屑和巨大細胞器；第三，通過高速差速離心獲得溶酶體；甚至，第四，可以通過等密度離心獲得純度更高的溶酶體。 

用戶自備

HANK平衡鹽緩沖溶液（12028）或PBS緩沖溶液（12033）：用于清理細胞
胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液（12024）：用于細胞脫離
*細胞培養(yǎng)液（12052）：用于細胞處理所需的培養(yǎng)基
15毫升錐形離心管：用于樣品操作的容器
50毫升錐形離心管：用于樣品操作的容器
1.5毫升離心管：用于樣品操作的容器
6毫升超速離心管：用于超高速離心的容器
4℃臺式離心機：用于沉淀細胞
4℃超速離心機：用于分離細胞器成分
DOUNCE勻漿器：用于裂解組織細胞
注意事項

1．本產(chǎn)品為10次（1克動物組織或 108細胞）操作
2．所有操作均須嚴格在4℃或以下狀態(tài)進行
3．操作時，須戴手套
4．操作時，須無菌操作，避免污染母液，尤其是裂解液（Reagent B）、分離液（Reagent E）和高純液系列
5．建議使用足夠的樣品量
6．建議嚴格控制操作時間
7．通常勻化次數(shù)為40至80下（或細胞顆粒群/組織塊狀消失為止）達到80％的細胞裂解為理想狀態(tài)，但不同的組織或細胞類型會存在差異。用戶可以通過顯微鏡觀察3微升勻漿物的細胞裂解程度：完整細胞呈現(xiàn)發(fā)亮的圓環(huán)。低于50％可以增加勻化次數(shù)
8．通常孵育5分鐘（不宜超過5分鐘）達到80％的細胞裂解為理想狀態(tài)，但不同的組織或細胞類型會存在差異。用戶可以通過顯微鏡觀察3微升裂解物的細胞裂解程度：完整細胞呈現(xiàn)發(fā)亮的圓環(huán)。低于50％可以增加孵育時間和渦旋震蕩次數(shù)
9．對于難以裂解的細胞，例如HeLa細胞，采用物理勻漿法是優(yōu)先推薦的技術(shù)處理
10．使用高純液前，須搖勻后加入 
11．根據(jù)超速離心管的大小調(diào)整高純液的使用量或在樣品上面加上石蠟油填滿
12．通常1克動物組織或 108細胞的溶酶體含量為300微克左右溶酶體蛋白
13．本產(chǎn)皮可以獲得99％以上純度的溶酶體  
14．溶酶體標志酶活性測定，建議使用通用型N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶（NAG）活性比色法定量檢測試劑盒—70031.1和純化溶酶體酸性磷酸酶活性比色法定量檢測試劑盒—50318.3 
15．溶酶體形態(tài)和功能染色，建議使用細胞溶酶體形態(tài)染色試劑盒—10121和純化溶酶體功能中性紅檢測試劑盒—10323 
16．本公司提供系列溶酶體分析試劑產(chǎn)品
 
質(zhì)量標準

1．本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定
2．本產(chǎn)品經(jīng)鑒定分離的溶酶體內(nèi)外膜完整
3．本產(chǎn)品經(jīng)鑒定分離的溶酶體維持正?；钚?br />4．本產(chǎn)品經(jīng)鑒定不含污染性蛋白酶和核酶