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血液氧化應(yīng)血液氧化應(yīng)激活性氧魯米諾化學(xué)發(fā)光法定量檢測試劑盒

2016年12月02日 10:41:57人氣:593來源:上海哈靈生物科技有限公司

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【資料簡介】


血液氧化應(yīng)激活性氧魯米諾化學(xué)發(fā)光法定量檢測試劑盒產(chǎn)品說明書(中文版)
主要用途
血液氧化應(yīng)激活性氧(ROS)魯米諾化學(xué)發(fā)光法定量檢測試劑是一種旨在通過自由基探針魯米諾和強(qiáng)化劑
的參與下,體液樣品中的活性氧族使發(fā)光物氧化降解并發(fā)光,在化學(xué)發(fā)光儀(Luminometer)的幫助下定量
檢測樣品中活性氧族(過氧化氫)的生成和數(shù)量的而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心研制、成功實(shí)
驗(yàn)證明的。適用于各種動(dòng)物和人體血液樣品包括血漿、血清等活性氧族的檢測。產(chǎn)品嚴(yán)格無菌,即到即用,
操作簡易,性能穩(wěn)定,檢測敏感。
技術(shù)背景
超氧自由基陰離子(superoxide radical;O2-)、過氧化氫(hydrogen peroxide;H2O2)、羥自由基或氫氧基
(hydroxyl radical;OH-)、過氧化基(peroxyl radical;ROO-)、氫過氧自由基(hydroperoxyl;HOO)、烷氧
自由基(alcoxyl radical)、氮氧基(nitric Oxide;NO-)、過氧亞硝基陰離子(peroxynitrite anion;ONOO-)
次氯酸(hypochlorous acid;HOCl)、半醌自由基(semiquinone radical)、單線態(tài)氧氣(singlet oxygen)等
細(xì)胞內(nèi)活性氧族(Reactive Oxygen Species;ROS)的產(chǎn)生和增多,甚而導(dǎo)致諸如男性不育、冠心病、風(fēng)濕
性關(guān)節(jié)炎、退行變等各種病理狀況。魯米諾(luminol),又稱氨基鄰苯二甲酰肼(luminol;
3-aminophthalic hydrazide 5-amino-2,3-dihvdro- 1,4-phthalazinedione),是一種脂溶性的發(fā)光劑,氧化后生成
魯米諾自由基而化學(xué)發(fā)光,具有460nm左右峰值的帶狀光譜,肉眼可觀察到鮮明的紫藍(lán)色。魯米諾以單價(jià)
氧化形式與超氧自由基陰離子反應(yīng),產(chǎn)生不穩(wěn)定性內(nèi)過氧化物或二氧環(huán)丁烷(Dioxetane),由此分解成電激
發(fā)狀態(tài),通過釋放光子,回復(fù)到基態(tài)。魯米諾作為探針,可以檢測體液中過氧化氫、超氧自由基陰離子和
羥自由基,其中過氧化氫zui強(qiáng),其發(fā)光強(qiáng)度與過氧化氫水平成正相關(guān)。
產(chǎn)品內(nèi)容
清理液(Reagent A) 毫升
強(qiáng)化液(Reagent B) 毫升
發(fā)光液(Reagent C) 毫升
產(chǎn)品說明書1 份
保存方式
保存強(qiáng)化液(Reagent B)和發(fā)光液(Reagent C)在-20℃冰箱里,嚴(yán)格避免光照;其余的保存在4℃冰箱
里;有效保證6 月
用戶自備
抗凝管:用于血液采集的容器
1.5 毫升離心管:用于樣品操作的容器
微型臺式離心機(jī):用于去除樣品雜質(zhì)
測試管或黑色96 孔板:用于發(fā)光檢測用的容器
化學(xué)發(fā)光儀:用于檢測化學(xué)發(fā)光
實(shí)驗(yàn)步驟
一、樣品預(yù)處理
選擇一:血漿樣品
1. 準(zhǔn)備好抗凝管
2. 抽取1 毫升血液,置于抗凝管里
3. 放進(jìn)4℃微型臺式離心機(jī)離心10 分鐘,速度為700g(或3000RPM,例如eppendorf 5415)
4. 小心移取上層黃色液體到新的1.5 毫升離心管――此為血漿成分(注意:避免觸碰白色液體層)
5. (選擇步驟)放進(jìn)-70℃冰箱里保存
6. 放進(jìn)37℃培養(yǎng)箱里備用(1 小時(shí)內(nèi))
選擇二:血清樣品
1. 準(zhǔn)備好不含抗凝劑的儲(chǔ)存管
2. 抽取1 毫升血液,置于儲(chǔ)存管里
3. 室溫下,靜置30 分鐘,直至血液凝結(jié)
4. 放進(jìn)4℃微型臺式離心機(jī)離心15 分鐘,速度為2000g(或5000RPM,例如eppendorf 5415)
5. 小心移取上層黃色液體到新的1.5 毫升離心管――此為血清成分(注意:避免觸碰白色液體層)
6. (選擇步驟)放進(jìn)-70℃冰箱里保存
7. 放進(jìn)37℃培養(yǎng)箱里備用(1 小時(shí)內(nèi))
二、測讀
測讀開始前,打開化學(xué)發(fā)光儀,設(shè)定儀器內(nèi)溫度為37℃預(yù)熱和整合測讀10 秒或15 分鐘;然后關(guān)掉實(shí)驗(yàn)室
的燈光。將-20℃冰箱里的試劑置入冰槽里融化,嚴(yán)格置于暗室里。然后進(jìn)行下列操作。
1. 準(zhǔn)備好測試管,做好標(biāo)記:陰性對照、樣品本底和樣品活性
2. 移取xx 微升清理液(Reagent A)到陰性對照測試管
3. 移取400 微升上述預(yù)處理的待測血液到樣品本底測試管
4. 移取400 微升上述預(yù)處理的待測血液到樣品活性測試管
5. 分別加入xx 微升強(qiáng)化液(Reagent B)到上述測試管,除樣品本底測試管外
6. 分別加入xx 微升發(fā)光液(Reagent C)到上述測試管,除樣品本底測試管外
7. 輕輕渦旋混勻
8. 即刻放進(jìn)37℃化學(xué)發(fā)光儀里測讀
9. 整合測讀10 秒,獲得相對發(fā)光單位(relative light unit;RLU)
10.或者整合測讀15 分鐘,獲得光電子讀數(shù):X 106 CPM(counted photon per minute)(注意:可以使用液
體閃爍儀替代)
11.計(jì)算ROS 水平:
注意事項(xiàng)
1. 本產(chǎn)品為50 次操作
2. 操作時(shí),須戴手套
3. 測試前,血液須新鮮收集,1 小時(shí)內(nèi)為
4. 樣品制備后即刻測讀,不宜過夜保存
5. 必要時(shí),例如活性氧族過低,可以濃縮樣品處理
6. 如果測定體系變化,則試劑用量相應(yīng)變化
7. 系統(tǒng)操作過程中,陰性對照只需測定一次
8. 測讀的所有步驟均須在暗室里進(jìn)行
9. 如果是注射式化學(xué)發(fā)光儀,建議測試前后使用無離子水沖洗化學(xué)發(fā)光儀注射(injector)管道
10.本公司提供系列活性氧分析試劑產(chǎn)品
質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)
1. 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定
2. 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定檢測敏感

上海哈靈生物科技有限公司作者

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