植物ATP含量試劑盒分光光度法

【資料簡(jiǎn)介】

植物ATP含量試劑盒分光光度法測(cè)定意義： 
ATP 廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中，是生物能量通貨，能荷是描述細(xì)胞能量
代謝狀態(tài)的主要參數(shù)。測(cè)定 ATP含量并且計(jì)算能荷，能夠反映能量代謝狀態(tài)。 
測(cè)定原理： 
肌酸激酶催化肌酸和 ATP反應(yīng)生成磷酸肌酸，可在700nm下用磷鉬酸比色法檢測(cè)磷酸肌酸
含量，以此反應(yīng) ATP含量。 
自備儀器和用品： 
分光光度計(jì)、水浴鍋、可調(diào)式移液槍、1mL石英比色皿、研缽和蒸餾水。 
試劑組成和配制： 
酸性提取液：液體 60mL×1瓶，4℃保存； 
堿性提取液：液體 60mL×1瓶，4℃保存； 
試劑一：粉劑×1支，4℃保存；臨用前加入 2mL蒸餾水充分溶解待用；用不完的試劑 4℃保
存； 
試劑二：液體3mL×1 瓶，4℃保存； 
試劑三：粉劑×1 瓶，-20℃保存；臨用前加入300μL蒸餾水充分溶解待用；用不完的試劑 4
℃保存一周； 
試劑四：液體10mL×1 瓶，4℃保存； 
試劑五：液體50mL×1 瓶，4℃保存； 
植物ATP含量試劑盒分光光度法標(biāo)準(zhǔn)液：液體10mL×1 瓶，1μmol/mLATP標(biāo)準(zhǔn)液，4℃保存； 
  ATP提?。?nbsp;
1、血清（漿）中 ATP的提?。喊凑昭澹{）體積（mL） ：酸性提取液體積（mL）為 1：
5~10 的比例（建議取約0.1mL血清（漿），加入 1mL 酸性提取液） ，進(jìn)行冰浴勻漿，8000g 4 
℃離心 10min；取上清液至另一 EP管中，加入等體積的堿性提取液使之中和，混勻，8000g 
4  ℃離心 10min，取上清，置冰上待測(cè)（不可用于蛋白質(zhì)含量測(cè)定） 。 
2、組織中 ATP 的提?。喊凑战M織質(zhì)量（g） ：酸性提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議
稱取約 0.1g 組織，加入 1mL 酸性提取液），進(jìn)行冰浴勻漿，8000g  4℃離心 10min，取上清
至另一 EP 管中，加入等體積的堿性提取液使之中和，混勻，8000g  4 ℃離心 10min，取上
清，置冰上待測(cè)（不可用于蛋白質(zhì)含量測(cè)定） 。 
3、細(xì)胞或細(xì)菌中 ATP的提取：先收集細(xì)胞或細(xì)菌到離心管內(nèi)，棄上清，按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)
量（104
個(gè)）：酸性提取液體積（mL）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入
1mL酸性提取液）， 超聲波破碎 1min （冰浴， 強(qiáng)度 20％或 200W， 超聲 2s， 停1s）， 8000g 4 ℃
離心 10min；取上清液至另一 EP管中，加入等體積的堿性提取液使之中和，混勻，8000g 4 
℃離心 10min，取上清，置冰上待測(cè)（不可用于蛋白質(zhì)含量測(cè)定） 。 
測(cè)定步驟： 
1、分光光度計(jì)預(yù)熱 30 min以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到 700nm，蒸餾水調(diào)零。 
2、顯色劑的配制：臨用前請(qǐng)根據(jù)擬用顯色劑體積（樣本數(shù)×0.87m L），按試劑四(mL)：試
劑五（mL）=1：5 的比例配制。用多少配多少。 
3、樣本測(cè)定： 
試劑名稱(μL)  測(cè)定管  對(duì)照管  標(biāo)準(zhǔn)管  空白管 
樣本  30  30     
標(biāo)準(zhǔn)液      30  30 
試劑一  60    60   
試劑二  30  30  30  30 
試劑三  10    10   
蒸餾水    70    70 
充分混勻，37℃準(zhǔn)確水浴 30min   
顯色劑  870  870  870  870 
37℃水浴 20min后，700nm下測(cè)定各管吸光值 
注意：空白管和標(biāo)準(zhǔn)管通常只需要各做一個(gè)。每個(gè)測(cè)定管設(shè)一個(gè)對(duì)照管。 
ATP含量計(jì)算： 
1、血清（漿）中 ATP含量計(jì)算 
ATP 含量(μmol/mL)=[C 標(biāo)準(zhǔn)管×(A 測(cè)定管－A 對(duì)照管)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)管－A 空白管) 
×V1]÷(V3×V1÷V2)=20×(A測(cè)定管－A對(duì)照管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管－A空白管) 
2、組織、細(xì)菌或細(xì)胞中 ATP含量計(jì)算 
（1）按蛋白濃度計(jì)算 
ATP 含量(μmol/mg  prot)=[C 標(biāo)準(zhǔn)管×(A 測(cè)定管－A 對(duì)照管)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)管－A 空白管) 
×V1]÷(V1÷Cpr）=1×(A測(cè)定管－A對(duì)照管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管－A空白管)÷Cpr 
蛋白質(zhì)含量需要另外測(cè)定。 
（2）按樣本鮮重計(jì)算 
ATP 含量 μmol/g 鮮重)=[C 標(biāo)準(zhǔn)管×(A 測(cè)定管－A 對(duì)照管)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)管－A 空白管) 
×V1]÷(W×V1÷V2)=2×(A測(cè)定管－A對(duì)照管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管－A空白管)÷W 
（3）按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算 
ATP 含量(μmol/104
  cell）=[C 標(biāo)準(zhǔn)管×(A 測(cè)定管－A 對(duì)照管)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)管－A 空白管) 
×V1]÷(500×V1÷V2)=0.004×(A測(cè)定管－A對(duì)照管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管－A空白管)÷W 
C 標(biāo)準(zhǔn)管：標(biāo)準(zhǔn)液濃度，1μmol/mL；V1：加入反應(yīng)體系中樣本體積，0.03mL；V2：加入
提取液體積，2mL；V3：加入血清（漿）體積：0.1mL；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；  W：
樣本質(zhì)量，g；500：細(xì)胞或細(xì)菌總數(shù)，500 萬(wàn)。 
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