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丙酮酸檢測試劑盒說明書下載

2015年09月22日 10:16:44人氣:1441來源:信帆生物

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關(guān) 鍵 詞丙酮酸(pyruvic acid PA)檢測試劑盒說明書下載,丙酮酸(pyruvic acid
【資料簡介】

丙酮酸(pyruvic  acid PA)檢測試劑盒說明書下載

測定意義:

丙酮酸通過乙酰 CoA 連接葡萄糖、脂肪酸和氨基酸三大代謝,起著重要的樞紐作用。

測定原理:

丙酮酸與 2,4-二硝基苯肼作用,生成丙酮酸-2,4-二硝基苯腙,在堿性溶液中呈櫻紅色。

需自備的儀器和用品:

可見分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1 mL 玻璃比色皿、研缽、冰、蒸餾水。

試劑的組成和配制:

提取液:液體 50mL×1 瓶,4℃保存; 試劑一:液體 5mL×1 瓶, 4℃保存; 試劑二:液體 25mL×1 瓶, 4℃保存。 丙酮酸提。

1、細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞:先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量

104 個(gè)):提取液體積(mL)為 500~10001 的比例(建議 500 萬細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL 提 取液),超聲波破碎(冰浴,功率 20%或 200W,超聲 3s,間隔 10s,重復(fù) 30 次),靜置 30min, 8000g,常溫離心 10min,取上清待測。

2、組織:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)15~10 的比例(建議稱取約 0.1g 組織, 加入 1mL 提取液),進(jìn)行冰浴勻漿,靜置 30min8000g,常溫離心 10min,取上清待測。 3、血清(漿)樣品:按照血清(漿)體積(mL):提取液體積(mL)15~10 的比例(建 議取 0.1mL 血清(漿)加入 1mL 提取液),進(jìn)行冰浴勻漿,靜置 30min8000g,常溫離心 10min,取上清待測。

測定步驟:

1、 分光光度計(jì)預(yù)熱 30min 以上,調(diào)節(jié)波長至 520nm,蒸餾水調(diào)零。

2、取 300μL 樣本+100μL 試劑一于 1.5mL EP 管中,混勻,靜置 2min,加入 500μL 試劑二, 混勻,于 520nm 波長處測定管吸光值 A。

丙酮酸含量計(jì)算:

1、標(biāo)準(zhǔn)條件下測定回歸方程為 y = 0.0466x + 0.0675; x 為丙酮酸鈉含量(μg/mL),y 為吸 光值。

2、按照血清(漿)體積計(jì)算

丙酮酸含量(μg/mL= [(A-0.0675)÷0.0466×V1]÷V3×V1÷V2=214.6×(A-0.0675)

3、按照蛋白濃度計(jì)算

丙酮酸含量(μg/mg prot=[(A-0.0675)÷0.0466×V1]÷(V1×Cpr)=21.46×(A-0.0675) ÷Cpr

4、按照樣品質(zhì)量計(jì)算

丙酮酸含量(μg/g 鮮重)= [(A-0.0675)÷0.0466×V1]÷(W ×V1÷V2=21.46×(A-0.0675) ÷W

3、按照細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算

丙酮酸含量(μg/104 cell)=[(A-0.0675)÷0.0466×V1]÷500×V1÷V2=0.043×(A-0.0675)

V1:加入反應(yīng)體系中樣本體積,0.3mLV2:加入提取液體積,1 mLV3:加入血清(漿) 體積,0.1 mL; Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,g;500:細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù), 500 萬。


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