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大鼠甲1型流感病毒試劑盒說明書

2010年09月02日 08:32:10人氣:779來源:上海瑞齊生物科技有限公司

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【資料簡介】

大鼠甲1型流感病毒酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用說明書

試劑盒僅供研究使用。

                                                                                                                               96T
 
使用目的:
本試劑盒用于測定大鼠血清、血漿及相關(guān)液體樣本中甲1型流感病毒表達。
實驗原理
本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中大鼠甲1型流感病毒表達。用純化的大鼠甲1型流感病毒抗體包被微孔板,制成固相抗體,可與樣品中甲1型流感病毒相結(jié)合,經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的抗原和其他成分后再與HRP標記的甲1型流感病毒抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),與CUTOFF值相比較,從而判定標本中大鼠甲1型流感病毒的存在與否。
試劑盒組成
標本要求
1.標本采集后盡早進行提取,提取按相關(guān)文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融
2.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
操作步驟
1.         編號:將樣品對應微孔按序編號,每板應設(shè)陰性對照2孔、陽性對照2孔、空白對照1孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)
2.         加樣:分別在陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照50μl。然后在待測樣品孔先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻,
3.         溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。  
4.         配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
5.         洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。
6.         加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。
7.         溫育:操作同3。
8.         洗滌:操作同5。
9.         顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.
10.     終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。
11.     測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。
 
 
計算和結(jié)果判定:
  試驗有效性:陽性對照孔平均值≥1.00; 陰性對照平均值≤0.10
 臨界值(CUT OFF)計算:臨界值=陰性對照孔平均值+0.15
 陰性判定:樣品OD值< 臨界值(CUT OFF)者為大鼠甲1型流感病毒陰性
 陽性判定:樣品OD值≥ 臨界值(CUT OFF)者為大鼠甲1型流感病毒陽性

上海瑞齊生物科技有限公司作者

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