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血糖測定實驗

2015年05月22日 13:38:23人氣:176來源:上海彩佑實業(yè)有限公司

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關(guān) 鍵 詞血糖測定實驗
【資料簡介】

實驗方法原理    血糖中β-D葡萄糖在葡萄糖氧化酶催化下,氧化成葡萄糖酸,并產(chǎn)生過氧化氫,過氧化氫在過氧化物酶催化下,氧化氧的受體——鄰聯(lián)甲苯胺產(chǎn)生有色化合物。在有足夠的葡萄糖氧化酶和過氧化物酶存在下,形成有色化合物的量和葡萄糖的量成正比,并在625 nm處有zui大吸收。
實驗材料    葡萄糖
試劑、試劑盒    鄰聯(lián)甲苯胺 醋酸 葡萄糖氧化酶 辣根過氧化酶
儀器、耗材    試管 試管架 吸量管 722S分光光度計
實驗步驟    
溶液配制: 

1. 1%鄰聯(lián)甲苯胺溶液:1 g鄰聯(lián)甲苯胺溶于100 ml無水乙醇,于棕色瓶保存。
 
2.醋酸緩沖液(pH 5):300 ml 0.15 mol/L醋酸(8.7 ml冰乙酸定容至1 L),700 ml 0.15 mol/L醋酸鈉混合后調(diào)pH 至5(用氫氧化鈉或鹽酸)。
 
3.葡萄糖氧化酶,辣根過氧化酶:10 mg溶于10 ml水中,放于4 ℃保存。
 
4.含鄰聯(lián)甲苯胺試劑:150 mlpH5醋酸鹽緩沖液,1 ml葡萄糖氧化酶溶液,1 ml過氧化物酶,1 ml 1%鄰聯(lián)甲苯胺溶液,混合后保存在4 ℃下,可存放7周。
 
5.標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖溶液:100 mg干燥的葡萄糖溶于100 ml 0.3%安息香酸溶液(安息香酸0.3 g溶于100 ml水),成1 mg/ml。

實驗操作:

取三支試管,按如下順序操作:

空白管蒸餾水                                      1 ml
標(biāo)準(zhǔn)管標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖溶液                      1 ml
測定管待測樣品(無蛋白血濾液)       1 ml

待測樣品含糖控制在400~600 μg/ml。每隔半分鐘依次向各管加入含鄰聯(lián)甲苯胺試劑5 ml,立即混合并準(zhǔn)確反應(yīng)10min(夏季反應(yīng)時間可縮短),在波長625 nm處,每隔半分鐘分別讀取光密度值,以空白作為比色時的對照。

按下列公式計算:


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