血糖測定實驗

【資料簡介】

實驗方法原理    血糖中β－Ｄ葡萄糖在葡萄糖氧化酶催化下，氧化成葡萄糖酸，并產(chǎn)生過氧化氫，過氧化氫在過氧化物酶催化下，氧化氧的受體——鄰聯(lián)甲苯胺產(chǎn)生有色化合物。在有足夠的葡萄糖氧化酶和過氧化物酶存在下，形成有色化合物的量和葡萄糖的量成正比，并在625 nm處有zui大吸收。
實驗材料    葡萄糖
試劑、試劑盒    鄰聯(lián)甲苯胺 醋酸 葡萄糖氧化酶 辣根過氧化酶
儀器、耗材    試管 試管架 吸量管 722S分光光度計
實驗步驟    
溶液配制： 

1. 1％鄰聯(lián)甲苯胺溶液：1 g鄰聯(lián)甲苯胺溶于100 ml無水乙醇，于棕色瓶保存。
 
2．醋酸緩沖液（ｐH 5）：300 ml 0.15 mol/L醋酸（8.7 ml冰乙酸定容至1 L），700 ml 0.15 mol/L醋酸鈉混合后調(diào)ｐH 至５（用氫氧化鈉或鹽酸）。
 
3．葡萄糖氧化酶，辣根過氧化酶：10 mg溶于10 ml水中，放于4 ℃保存。
 
4．含鄰聯(lián)甲苯胺試劑：150 mlpH5醋酸鹽緩沖液，1 ml葡萄糖氧化酶溶液，1 ml過氧化物酶，1 ml 1％鄰聯(lián)甲苯胺溶液，混合后保存在4 ℃下，可存放7周。
 
5．標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖溶液：100 mg干燥的葡萄糖溶于100 ml 0.3%安息香酸溶液（安息香酸0.3 ｇ溶于100 ml水），成1 mg/ml。

實驗操作：

取三支試管，按如下順序操作：

空白管蒸餾水                                      1 ml
標(biāo)準(zhǔn)管標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖溶液                      1 ml
測定管待測樣品(無蛋白血濾液)       1 ml

待測樣品含糖控制在400～600 μg/ml。每隔半分鐘依次向各管加入含鄰聯(lián)甲苯胺試劑5 ml，立即混合并準(zhǔn)確反應(yīng)10min（夏季反應(yīng)時間可縮短），在波長625 nm處，每隔半分鐘分別讀取光密度值，以空白作為比色時的對照。

按下列公式計算：