鹽析法純化免疫球蛋白

【資料簡介】

(一) 原理

蛋白質在水溶液中的溶解度是由蛋白質周圍親水基團與水形成水化膜的程度，以及蛋白質分子帶有電荷的情況決定的。當用中性鹽加入蛋白質溶液，中性鹽對水分子的親和力大于蛋白質，于是蛋白質分子周圍的水化膜層減弱乃至消失。同時，中性鹽加入蛋白質溶液后，由于離子強度發(fā)生改變，蛋白質表面電荷大量被中和，更加導致蛋白溶解度降低，使蛋白質分子之間聚集而沉淀。

(二) 主要材料

1. 試劑：

(1) 正常人混合血清；滅菌生理鹽水。

(2) 飽和硫酸銨溶液的配制：稱（NH₄）₂SO₄（AR）400～425克，以50～80℃之蒸餾水500ml溶解，攪拌20分鐘，趁熱過濾。冷卻后以濃氨水（15N NH₄OH）調(diào)PH至7.4。配制好的飽和硫酸銨，瓶底應有結晶析出。

(3) 萘氏試劑配制： 稱HgI 11.5克，KI8克，加蒸餾水至50ml，攪拌溶解后，再加入20%NaOH 50ml。

(4) 0.02M，PH7.4磷酸鹽緩沖鹽液（Phosphate Buffered Saline PBS）配制。 
　 　貯存液： 
　　A液：0.2M Na₂HPO₄：Na₂HPO₄·12H₂O 71.64克，加蒸餾水至1000ml； 
　　B液：0.2M NaH₂P4：NaH₂P₄·2H₂O 3.12克，加蒸餾水至1000ml；
　　應用液：取A液81ml加B液19ml混合，再以生理鹽水作10倍稀釋即成。

(5) 0.1M，PH7.4磷酸鹽緩沖液（Phosphate Buffer PB）配制：
　　將上述A液取81ml與B液19ml混合，再以蒸餾水對倍稀釋即成。

(6) 20%磺基水楊酸。

2. 器材：

普通冰箱、離心機、電磁攪拌器、751桮型紫外分光光度計、扭力天平、粗天平。 
　　透析袋、尼龍繩、細竹棒、精密PH試紙（PH5.5～9.0）、子、小剪刀。 
　　燒杯、量筒、吸管、滴管、滅菌小瓶、試管等。