大腸桿菌轉化實驗

【資料簡介】

大腸桿菌轉化可以：（1）將重組DNA分子導入大腸桿菌受體細胞進行復制，增殖和表達，以獲得目的基因；（2）驗證大腸桿菌感受態(tài)細胞效果；（3）用于分子生物學其他研究。
實驗材料    大腸桿菌
試劑、試劑盒    CaCl2氨芐*LB
儀器、耗材    離心機分光光度計搖床
實驗步驟    
1.  接種—個單菌落于50 ml LB培養(yǎng)液中，于37℃搖床培養(yǎng)（250 r/min）。

2.  往一個2 L 的燒瓶中加入400 ml LB培養(yǎng)液，再加入4  ml 培養(yǎng)液，于37℃；搖床，培養(yǎng)至OD590為0.375。

3.  將培養(yǎng)液分裝到8個50 ml 預冷無菌的聚丙烯管中，于冰上放置5~10 min，然后于4℃，1 600 g 離心7 min。
 
4.  細胞沉淀用10 ml 冰冷的CaCl2“溶液重懸，于4℃，以1 100 g 離心5 min 。

5.  細胞沉淀用10 ml 冰冷的CaCl2溶液重懸，冰上放置30 min，于4℃，1 100 g 離心5 min。
 
6.  用2 ml  冰冷的CaCl2溶液重懸各管細胞，然后按每管250 μl 的量分裝于預冷的無菌聚丙烯管中，立即凍存于- 70℃。

7.  按照以下各步驟用10 ng pBR322轉化100 μl 感受態(tài)細菌。

8.  將合適體積的轉化物涂于含有氨芐*的LB平板上，37℃培養(yǎng)。

9.  將10 ng 加入到一個15 ml 無菌的圓底試管中，并放置冰上。

10.  將盛有感受態(tài)細胞菌的管子握在手上使菌液迅速熔化。

11.  立即將100 μl 感受態(tài)細菌加 入到管中，輕輕旋動，并放置冰上10 min 。

12.  將管故入42℃水浴2 min 進行熱休克，然后加入1 ml LB 培養(yǎng)液于每一支試管中。

13.  于37℃置滾筒式搖床口培養(yǎng)1 h。

14.  將幾個稀釋度菌液涂布于含合適抗生素的平板上，于37℃培養(yǎng)12~16 h。