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如何進(jìn)行細(xì)胞周期的測定

2015年01月19日 08:12:48人氣:638來源:上海士鋒生物科技有限公司

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關(guān) 鍵 詞如何進(jìn)行細(xì)胞周期的測定,如何進(jìn)行細(xì)胞
【資料簡介】

一、原理 
細(xì)胞周期指細(xì)胞一個(gè)世代所經(jīng)歷的時(shí)間。從一次細(xì)胞分裂結(jié)束到下一次分裂結(jié)束為一個(gè)周期。細(xì)胞周期反應(yīng)了細(xì)胞增殖速度。
 
單個(gè)細(xì)胞的周期測定可采用縮時(shí)攝影的方法,但它不能代表細(xì)胞群體的周期,故現(xiàn)多采用其他方法測群體周期。測定細(xì)胞周期的方法很多,有同位素標(biāo)記法、細(xì)胞計(jì)數(shù)法等,這里介紹一種利用BrdU滲入測定細(xì)胞周期的方法。
 
BrdU(5-溴脫氧核苷)加入培養(yǎng)基后,可做為細(xì)胞DNA復(fù)制的原料,經(jīng)過兩個(gè)細(xì)胞周期后,細(xì)胞中兩條單鏈均含BrdU的DNA將占l/2,反映在染色體上應(yīng)表現(xiàn)為一條單體淺染。如經(jīng)歷了三個(gè)周期,則染色體中約一半為兩條單體均淺染,另一半為一深一淺。細(xì)胞如果僅經(jīng)歷了一個(gè)周期,則兩條單體均深染。計(jì)分裂相中各期比例,就可算出細(xì)胞周期的值。
 
二、 儀器、用品與試劑
1.  儀器、用品:同常規(guī)細(xì)胞培養(yǎng)。
2.  試劑:BrdU(1.0 mg/ml),甲醇、冰醋酸,Giemsa染液,秋水仙素,2×SSC液。
 
三、操作步驟
1.  細(xì)胞生長至指數(shù)期時(shí),向培養(yǎng)液中加入BrdU,使zui終濃度為10 μg/ml。
2.  44小時(shí)加秋水仙素,使每ml中含0.1 μg。
3.  48小時(shí)后常規(guī)消化細(xì)胞至離心管中,注意培養(yǎng)上清的漂浮細(xì)胞也要收集到離心管中。
4.  常規(guī)染色體制片(見第三部分:染色體技術(shù))。
5.  染色體玻片置56℃水浴鍋蓋上,鋪上2×SSC 液,距紫外燈管6 cm處紫外照射30分鐘。
6.  棄去2×SSC液,流水沖洗。
7.  (Giemsa液染色10分鐘,流水沖洗,晾干。
8.  鏡檢100個(gè)分裂相,計(jì)*、二、三、四細(xì)胞期分裂指數(shù)。
9.  計(jì)算:
細(xì)胞周期(Tc)=48/{(M1+2M2+3M3+4M4)/100}(小時(shí))

上海士鋒生物科技有限公司作者

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