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技術(shù)中心

雞腦脊髓炎病毒抗體(AEV Ab)試劑盒使用說明書

2014年07月02日 08:17:55人氣:511來源:上海滬宇生物科技有限公司

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關(guān) 鍵 詞雞腦脊髓炎病毒抗體
【資料簡介】

 

使用目的:

本試劑盒用于測(cè)定雞血清、血漿及相關(guān)液體樣本中腦脊髓炎病毒抗體(AEV Ab)表達(dá)。 

實(shí)驗(yàn)原理

本試劑盒應(yīng)用雙抗原夾心法測(cè)定標(biāo)本中雞腦脊髓炎病毒抗體(AEV Ab)表達(dá)。用純化的抗原包被微孔板,制成固相抗原,可與樣品中腦脊髓炎病毒抗體(AEV Ab)相結(jié)合,經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的抗原和其他成分后再與 HRP 標(biāo)記的抗原結(jié)合,形成抗原-抗體-酶標(biāo)抗原復(fù)合物,經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB 在HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測(cè)定吸光度(OD 值) ,與CUTOFF值相比較,從而判定標(biāo)本中雞腦脊髓炎病毒抗體(AEV Ab)的存在與否。

試劑盒組成  

1  30 倍濃縮洗滌液  20ml×1瓶  7  終止液  6ml×1 瓶

酶標(biāo)試劑  6ml×1瓶  8  陽性對(duì)照  0.5ml×1 瓶

酶標(biāo)包被板  12 孔×8條  9  陰性對(duì)照  0.5ml×1 瓶

樣品稀釋液  6ml×1瓶  10  說明書  1 份

顯色劑A 液  6ml×1瓶  11  封板膜  2 張   

顯色劑B液  6ml×1/瓶  12  密封袋  1 個(gè)

標(biāo)本要求  

1.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn),可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融

2.不能檢測(cè)含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。

操作步驟

1. 編號(hào):將樣品對(duì)應(yīng)微孔按序編號(hào),每板應(yīng)設(shè)陰性對(duì)照2 孔、陽性對(duì)照2 孔、空白對(duì)照1孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)

2. 加樣:分別在陰、陽性對(duì)照孔中加入陰性對(duì)照、陽性對(duì)照 50µl。然后在待測(cè)樣品孔先加樣品稀釋液 40µl,然后再加待測(cè)樣品 10µl。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻,

3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。    

4. 配液:將30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水30 倍稀釋后備用

5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置 30 秒后棄去,如此重復(fù) 5次,拍干。

6. 加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50µl,空白孔除外。  

7. 溫育:操作同3。 8.  洗滌:操作同5。

9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50µl,再加入顯色劑B50µl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15 分鐘.

10. 終止:每孔加終止液 50µl,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色) 。

11. 測(cè)定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測(cè)量各孔的吸光度(OD 值) 。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后 15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。

操作程序總結(jié):

計(jì)算和結(jié)果判定:

試驗(yàn)有效性:陽性對(duì)照孔平均值≥1.00; 陰性對(duì)照平均值≤0.10

臨界值(CUT OFF)計(jì)算:臨界值=陰性對(duì)照孔平均值+0.15

陰性判定:樣品OD 值< 臨界值(CUT OFF)者為腦脊髓炎病毒抗體(AEV Ab)陰性

陽性判定:樣品OD 值≥  臨界值(CUT OFF)者為腦脊髓炎病毒抗體(AEV Ab)陽性 。  

注意事項(xiàng)

1.操作嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行,本試劑不同批號(hào)組分不得混用。 2.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。

3.濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出,稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶,洗滌時(shí)不影響結(jié)果。

4.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

5.底物請(qǐng)避光保存。

6.試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn),使用雙波長檢測(cè)時(shí),參考波長為630nm

7.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。終止液為 2M 的硫酸,使用時(shí)必須注意安全。

保存條件及有效期

1.試劑盒保存: ;2-8℃。

2.有效期:6個(gè)月 

上海滬宇生物科技有限公司作者

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