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大鼠果糖磷酸激酶1(PFK-1)ELISA試劑盒使用說明書

2013年09月09日 12:33:23人氣:188來源:南京生物試劑網(wǎng)

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關(guān) 鍵 詞大鼠果糖磷酸激酶1(PFK-1)ELISA試劑盒,大鼠(PFK-1)ELISA試劑盒,ELISA試劑
【資料簡(jiǎn)介】

           大鼠果糖磷酸激酶1(PFK-1)ELISA試劑盒使用說明書

本試劑僅供研究使用  目的:本試劑盒用于測(cè)定大鼠血清,血漿及相關(guān)液體樣本中果糖磷酸激酶1(PFK-1)含量。

  大鼠果糖磷酸激酶1(PFK-1)ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)原理:

    本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中大鼠果糖磷酸激酶1(PFK-1)水平。用純化的大鼠果糖磷酸激酶1(PFK-1)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入果糖磷酸激酶1(PFK-1),再與HRP標(biāo)記的果糖磷酸激酶1(PFK-1)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的果糖磷酸激酶1(PFK-1)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD值),通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中大鼠果糖磷酸激酶1(PFK-1)濃度。

  大鼠果糖磷酸激酶1(PFK-1)ELISA試劑盒樣本處理及要求:

1.血清:室溫血液自然凝固10-20分鐘,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,保存過程中如出現(xiàn)沉淀,應(yīng)再次離心。

2.血漿:應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA、者檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)該再次離心。

3.尿液:用無菌管收集,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照實(shí)行。

4.細(xì)胞培養(yǎng)上清:檢測(cè)分泌性的成份時(shí),用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí),用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細(xì)胞懸液,細(xì)胞濃度達(dá)到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融,以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。

5.組織標(biāo)本:切割標(biāo)本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測(cè),其余冷凍備用。

 

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