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2013酶聯(lián)免疫試劑盒測(cè)定方法
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關(guān) 鍵 詞 | 酶聯(lián)免疫試劑盒,酶聯(lián)免疫試劑盒均相測(cè)定,酶聯(lián)免疫試劑盒異相測(cè)定,酶聯(lián)免疫試劑盒固相測(cè)定 |
- 【資料簡(jiǎn)介】
酶聯(lián)免疫試劑盒固相酶免疫測(cè)定方法
固相酶免疫測(cè)定主要是指ELISA,其基本原理是:使抗原或抗體結(jié)合到某種固相載體表面(包被),并保持其免疫活性;用酶標(biāo)記(另一種)抗原或抗體,保留其免疫活性和酶活性;在測(cè)定時(shí),把待測(cè)標(biāo)本(測(cè)定其中的抗體或抗原)和酶標(biāo)抗原或抗體按不同的步驟與固相載體表面的抗原或抗體起反應(yīng);用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復(fù)合物與其他物質(zhì)分開(kāi),結(jié)合在固相載體上的酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量成一定的比例;加入酶反應(yīng)的底物后,底物被酶催化顯色,故可根據(jù)顏色的深淺進(jìn)行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高,具有放大反應(yīng)的效果,從而使測(cè)定方法達(dá)到很高的敏感度。根據(jù)測(cè)定對(duì)象的不同,ELISA有多種反應(yīng)類型。
均相酶免疫測(cè)定技術(shù)
以標(biāo)記抗體檢測(cè)標(biāo)本中的抗原為例,按照簡(jiǎn)單的形式在試劑抗體過(guò)量的情況下進(jìn)行:
Ab*+Ag—Ab*Ag+Ab*
如在抗原抗體反應(yīng)后Ab*Ag中的標(biāo)記物“*”失去其特性,例如酶失去其活性,則不需要進(jìn)行Ab*Ag與Ab*的分離,可以直接測(cè)定游離的Ab*量,從而間接推算出標(biāo)本中的Ag含量,這種方法稱為均相酶免疫測(cè)定。
酶聯(lián)免疫試劑盒均相酶免疫測(cè)定的測(cè)定對(duì)象為小分子抗原或半抗原,主要用于藥物測(cè)定。均相酶免疫測(cè)定的測(cè)定模式為競(jìng)爭(zhēng)抑制法,酶標(biāo)記的是待測(cè)抗原,檢測(cè)試劑中尚有針對(duì)待測(cè)抗原的抗體和酶的底物。與抗體結(jié)合的酶就失去其活力,因此在反應(yīng)中無(wú)需分離結(jié)合的酶與游離的酶即可進(jìn)行測(cè)定。其反應(yīng)過(guò)程與一般的生化測(cè)定無(wú)異,因此可直接用自動(dòng)生化分析儀進(jìn)行測(cè)定。均相酶免疫測(cè)定主要有酶擴(kuò)大免疫測(cè)定技術(shù)和克隆酶供體免疫測(cè)定兩種
異相酶免疫測(cè)定技術(shù)
酶免疫技術(shù)是以酶標(biāo)記的抗體或抗原為主要試劑進(jìn)行檢測(cè)的方法,是標(biāo)記免疫技術(shù)的一種,1966年Nakene和Pierce利用酶使底物顯色的作用而得到與熒光抗體技術(shù)相似的結(jié)果,20世紀(jì)70年代初,酶標(biāo)抗體技術(shù)開(kāi)始應(yīng)用于免疫測(cè)定,其后得到迅速發(fā)展。近年來(lái)標(biāo)記免疫技術(shù)飛速發(fā)展,應(yīng)用不同標(biāo)記物,根據(jù)不同原理、不同技術(shù)建立起來(lái)的檢測(cè)方法層出不窮。
酶免疫測(cè)定(enzymeimmunoassay,EIA)是以酶作為標(biāo)記物的免疫測(cè)定方法,利用酶的催化作用提高檢測(cè)的敏感度。根據(jù)抗原抗體反應(yīng)后是否需要分離結(jié)合的與游離的酶標(biāo)記物,酶免疫測(cè)定可分為均相(homogenous)和異相(heterogenous)兩種類型。
相對(duì)于均相酶免疫測(cè)定技術(shù),異相酶免疫測(cè)定在醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)應(yīng)用更為廣泛,其反應(yīng)過(guò)程中需經(jīng)過(guò)結(jié)合標(biāo)記物和游離標(biāo)記物的分離才能進(jìn)行測(cè)定。分離的方法主要借助固相載體,即將一種反應(yīng)物固定在固相載體上,當(dāng)另一種反應(yīng)物與之結(jié)合后,可通過(guò)洗滌、離心等方法令其與液相中的其他物質(zhì)分離,此類反應(yīng)亦稱為固相酶免疫測(cè)定。Engvall和Perimann于20世紀(jì)70年代初首先建立這種方法,稱之為ELISA。所謂的免疫吸附劑指的是吸附在固相載體上的免疫活性物質(zhì)ELISA在臨床及科研中應(yīng)用極為廣泛,已成為固相 酶聯(lián)免疫試劑盒 測(cè)定的代名詞。
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