實(shí)體組織單細(xì)胞懸液的制備

【資料簡介】

實(shí)體組織單細(xì)胞懸液的制備

 

1、酶消化法

 

⑴ 選取的組織立即放入預(yù)冷的組織培養(yǎng)液或PBS中，清洗血跡及其它污染物。去除組織塊中的塊死成分、纖維、脂肪及血管（專門制備相關(guān)細(xì)胞時(shí)除外）。

 

⑵ 用眼科剪將組織塊剪成1mm³左右小塊，放在預(yù)冷的組織培養(yǎng)液或PBS中并進(jìn)行漂洗，洗去剪碎的細(xì)胞碎片。

 

⑶ 加入適量酶消化液，37℃恒溫水浴消化20～30min，期間進(jìn)行間斷振蕩或吹打細(xì)胞。

 

⑷ 用冷培養(yǎng)液或PBS終止消化，用300目尼龍網(wǎng)過濾除去組織團(tuán)塊，收集濾過的細(xì)胞，500g離心10min后去上清，并用PBS洗1～2次。細(xì)胞計(jì)數(shù)總數(shù)不少于10⁶個(gè)細(xì)胞。

 

⑸ 如果下一步做DNA含量分析，則將細(xì)胞懸液用70%預(yù)冷乙醇4℃固定。如果做免疫熒光測定，則不用乙醇固定，須盡快染色后上機(jī)檢測。

 

2、機(jī)械法（網(wǎng)搓法）

 

⑴ 前處理同酶消化法⑴、⑵步。

 

⑵ 將300目尼龍網(wǎng)扎在小燒杯上，將剪碎的組織放在網(wǎng)上，以*或刮刀輕搓組織塊，邊搓邊以PBS沖洗，直至將組織搓完。

 

⑶ 收集細(xì)胞懸液，500g離心10min后去上清，并用PBS洗1～2次。細(xì)胞計(jì)數(shù)總數(shù)不少于10⁶個(gè)細(xì)胞。

 

⑷ 同酶消化法⑸步。