提取動(dòng)物組織DNA的方法

【資料簡(jiǎn)介】

提取動(dòng)物組織DNA的方法

 

【實(shí)驗(yàn)步驟】
1．組織塊解凍，用生理鹽水洗去血污，剪取約0.5g組織，剪小放入2.0ml離心管中，用FM-200P研磨45秒；
2．加入0.45ml TES混勻，再加入50ul SDS（10%），5.0ul蛋白酶K（20mg/ml），充分混勻后，于56°C保溫4-6h，每2h搖1次。
3．放置到室溫，加入等體積飽和酚（500ul），顛倒混勻，10000r/m，離心10m，分離水相和有機(jī)相，小心吸取上層含核酸的水相，到一個(gè)新的1.5ml離心管。
4．加入等體積酚：氯仿：異戊醇（25：24：1），顛倒混勻，10000r/m，離心10分鐘，取上層轉(zhuǎn)移到新的1.5/2.0ml離心管中;
5．加入等體積氯仿：異戊醇（24：1），顛倒混勻，10000r/m，離心10分鐘，取上層清液到一個(gè)新的1.5/2.0ml離心管;
6．加入2.5倍體積的-20°C預(yù)冷的無水乙醇沉淀DNA，觀察現(xiàn)象。
7．12000 r/m，離心10分鐘，棄乙醇;
8．-20°C保存的75%乙醇洗滌，10000 r/m，離心5分鐘，去乙醇，55°C干燥DNA;
9．加入適量TE溶解DNA（具體依DNA的多少而定），-20°C保存?zhèn)溆?

【注意事項(xiàng)】
1．抽提每一步用力要柔和，防止機(jī)械剪切力對(duì)DNA的損傷。
2．取上層清液時(shí)，注意不要吸起中間的蛋白質(zhì)層。
3．乙醇漂洗去乙醇時(shí)，不要蕩起DNA。
4．離心后，不要晃動(dòng)離心管，拿管要穩(wěn)，斜面朝外。