細胞培養(yǎng)過程

【資料簡介】

養(yǎng)細胞生長過程：潛伏期→指數(shù)增生期→停滯期 一、潛伏期（latent phase）： 細胞接種后,先經(jīng)過一個在培養(yǎng)液中呈懸浮狀態(tài)的懸浮期.此時,細胞質(zhì)回縮, 胞體呈圓球形.然后細胞貼附于載體表面,稱貼壁,懸浮期結(jié)束. 細胞貼壁速度與細胞種類, 培養(yǎng)基成分,載體的理化性質(zhì)等密切相關(guān)。一般情況下，原代培養(yǎng)細胞貼壁速度慢,可達10-24 小時或更多, 而傳代細胞系貼壁速度快, 通常10-30 分鐘即可貼壁。細胞貼壁后還需經(jīng)過一個潛伏階段，才進入生長和增殖期.原代培養(yǎng)細胞潛伏期，約24-96 小時或更長, 連續(xù)細胞系和腫瘤細胞潛伏期短，僅需6-24 小時。 二、指數(shù)增生期（logarithmic growth phase） 這是細胞增殖zui旺盛的階段，分裂相細胞增多。指數(shù)增生期細胞分裂相數(shù)量可作為判定細胞生長是否旺盛的一個重要標志。通常以細胞分裂相指數(shù)（Mitotic index, MI）表示，即細胞群中每1000 個細胞中的分裂相數(shù)。一般細胞的分裂指數(shù)介于0.1%-0.5%，原 代細胞分裂指數(shù)較低，而連續(xù)細胞和腫瘤細胞分裂相指數(shù)可高達3%－5%。 指數(shù)增生期的細胞是細胞活力時期，是進行各種實驗*時期，也是凍存細胞的時機。在接種細胞數(shù)量適宜情況下，指數(shù)增生期持續(xù)3－5 天后，隨著細胞數(shù)量不斷增多、生長空間減少，zui后細胞相互接觸匯合成片。正常細胞相互接觸后能抑制細胞運動，這種現(xiàn)象稱接觸抑制現(xiàn)象（contact inhibition）。而惡性腫瘤細胞無接觸抑制現(xiàn)象，能繼續(xù)移動和增殖，導(dǎo)致細胞向三維空間擴展，使細胞發(fā)生堆積（piled up）。細胞接觸匯合成片后，雖然發(fā)生接觸抑制，但只要營養(yǎng)充分，細胞仍能進行增殖分裂，因此細胞數(shù)仍然在增多。但是，當細胞密度進一步增大，培養(yǎng)液中營養(yǎng)成分減少，代謝產(chǎn)物增多時，細胞因營養(yǎng)枯竭和代謝產(chǎn)物的影響，導(dǎo)致細胞分裂停止，這種現(xiàn)象稱密度抑制現(xiàn)象（Density Inhibition）。 三、停滯期（Stagnate phase） 細胞數(shù)量達到飽和密度后，如不及時進行傳代，細胞就會停止增殖，進入停止期。此時細胞數(shù)持平，故也稱平臺期（Plateau phase）。停滯期細胞雖不增殖，但仍有代謝活動。如不進行分離傳代，細胞會因培養(yǎng)液中營養(yǎng)耗盡、代謝產(chǎn)物積聚、pH 下降等因素中毒，出現(xiàn)形態(tài)改變，貼壁細胞會脫落，嚴重的會發(fā)生死亡，因此，應(yīng)及時傳代。