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人B細(xì)胞淋巴瘤因子2(Bcl-2)實驗原理及操作步驟

2011年05月09日 10:52:36人氣:1266來源:上海勁馬實驗設(shè)備有限公司

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【資料簡介】

人B細(xì)胞淋巴瘤因子2(Bcl-2)實驗原理
本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中人 B 細(xì)胞淋巴瘤因子 2(Bcl-2)水平。用純化的
人 B 細(xì)胞淋巴瘤因子 2(Bcl-2)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次
加入 B細(xì)胞淋巴瘤因子2(Bcl-2),再與HRP標(biāo)記的B細(xì)胞淋巴瘤因子2(Bcl-2)抗體結(jié)合,
形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng)過*洗滌后加底物 TMB 顯色。TMB 在 HRP 酶的催
化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的 B 細(xì)胞淋巴
瘤因子 2(Bcl-2)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在 450nm波長下測定吸光度(OD 值),通過標(biāo)準(zhǔn)曲線
計算樣品中人 B細(xì)胞淋巴瘤因子2(Bcl-2)濃度。
人B細(xì)胞淋巴瘤因子2(Bcl-2)操作步驟
1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋:本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀
釋。
80μg/L 5 號標(biāo)準(zhǔn)品 150μl的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
40μg/L 4 號標(biāo)準(zhǔn)品 150μl的5 號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
20μg/L 3 號標(biāo)準(zhǔn)品 150μl的4 號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
10μg/L 2 號標(biāo)準(zhǔn)品 150μl的3 號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
5μg/L 1 號標(biāo)準(zhǔn)品 150μl的2 號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
2. 加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,
然后再加待測樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡
量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30 分鐘。    
4. 配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置 30 秒后棄去,如此
重復(fù) 5次,拍干。
6. 加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外。
7. 溫育:操作同 3。
8. 洗滌:操作同 5。
9. 顯色:每孔先加入顯色劑 A50μl,再加入顯色劑 B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色
15 分鐘.
10. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。
11. 測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應(yīng)在加終止
液后 15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。

上海勁馬實驗設(shè)備有限公司作者

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