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丙二醛(MDA)含量試劑盒說明書

2018年04月19日 11:55:42人氣:1940來源:南京信帆生物技術(shù)有限公司

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關(guān) 鍵 詞丙二醛
【資料簡(jiǎn)介】

丙二醛(MDA)含量試劑盒說明書

測(cè)定意義:
氧自由基作用于脂質(zhì)的不飽和脂肪酸,生成過氧化脂質(zhì);后者逐漸分解為一系列復(fù)雜的化合
物,其中包括MDA。通過檢測(cè)MDA 的水平即可檢測(cè)脂質(zhì)氧化的水平。

測(cè)定原理:
MDA 與硫代酸(thiobarbituric acid,TBA)縮合,生成紅色產(chǎn)物,在532nm 有zui大吸收
峰,進(jìn)行比色后可估測(cè)樣品中過氧化脂質(zhì)的含量;同時(shí)測(cè)定600nm 下的吸光度,利用532nm
與600nm 下的吸光度的差值計(jì)算MDA 的含量。

需自備的儀器和用品:
可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、微量玻璃比色皿/96 孔板、
研缽、冰和蒸餾水。

試劑的組成和配置:
提取液:液體100mL×1 瓶,4℃保存;
試劑一:液體30mL×1 瓶,4℃保存;

注意事項(xiàng):
臨用前注意試劑一是否*溶解,如未溶解,可以70℃-90℃加熱,并振蕩以促進(jìn)溶解。

MDA 提。
1、細(xì)菌、細(xì)胞或組織樣品的制備:
細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞:先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量
(104 個(gè)):提取液體積(mL)為500~1000:1 的比例(建議500 萬細(xì)菌或細(xì)胞加入1mL 提
取液),超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復(fù)30 次);
8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。
組織:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為1:5~10 的比例(建議稱取約0.1g 組織,
加入1mL 提取液),進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。
2、血清(漿)樣品:直接檢測(cè)。

測(cè)定步驟:
1、吸取0.3mL 試劑一于1.5mL 離心管中,再加入0.1mL 樣本, 混勻。
2、95℃水浴中保溫30min(蓋緊,防止水分散失),置于冰浴中冷卻,10000g,25℃,離心
10min。
3、吸取200μL 上清液于微量石英比色皿或96 孔板中,測(cè)定532nm 和600nm 處的吸光度,
記為A532 和A600,ΔA= A532-A600。
MDA 含量計(jì)算:
a. 用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下
1、血清(漿)中MDA 含量的計(jì)算:
MDA 含量(nmol/ mL)=[ ΔA×V 反總÷(ε×d)×109]÷V 樣=25.8×ΔA
2、細(xì)菌、細(xì)胞或動(dòng)物組織中MDA 含量計(jì)算
(1)按照蛋白濃度計(jì)算
MDA 含量(nmol/ mg prot)=[ ΔA×V 反總÷(ε×d)×109]÷(Cpr×V 樣)=25.8× ΔA ÷Cpr
需要另外測(cè)定,建議使用本公司BCA 蛋白質(zhì)含量測(cè)定試劑盒。
(2)按照樣品質(zhì)量計(jì)算
MDA 含量(nmol/g 鮮重)=[ ΔA×V 反總÷(ε×d)×109]÷(W ×V 樣÷V 樣總)=25.8×ΔA ÷W
(3 ) 按照細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算:
MDA 含量(nmol/104)=[ ΔA×V 反總÷(ε×d)×109]÷(500×V 樣÷V 樣總)=0.0516×ΔA
V 反總:反應(yīng)體系總體積, 4×10-4 L;ε:丙二醛摩爾消光系數(shù),155×103 L / mol /cm;d:
比色皿光徑,1cm;V 樣:加入樣本體積,0.1 mL;V 樣總:加入提取液體積,1 mL;Cpr:
樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,g;500:細(xì)胞或細(xì)菌總數(shù),500 萬。
b.用96 孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下
1、血清(漿)中MDA 含量的計(jì)算:
MDA 含量(nmol/ mL)=[ ΔA×V 反總÷(ε×d)×109]÷V 樣=51.6×ΔA
 

南京信帆生物技術(shù)有限公司作者

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