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豬*實(shí)驗(yàn)原理

時(shí)間:2013-12-31閱讀:583
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豬*實(shí)驗(yàn)原理:*是以無活性的酶原形式存在于動(dòng)物胰臟中,在Ca2 的存在下,被腸激酶或有活性的*自身激活,從肽鏈N端賴氨酸和異*殘基之間的肽鍵斷開,失去一段六肽,分子構(gòu)象發(fā)生一定改變后轉(zhuǎn)變?yōu)橛谢钚缘?。
    *原的分子量約為24000,其等電點(diǎn)約為pH8.9,*的分子量與其酶原接近(23300),其等電點(diǎn)約為pH10.8,zui適pH7.6~8.0,在pH=3時(shí)zui穩(wěn)定,低于此pH時(shí),*易變性,在pH>5時(shí)易自溶。Ca2 離子對*有穩(wěn)定作用。
    重金屬離子,有機(jī)磷化合物和反應(yīng)物都能抑制*的活性,胰臟、卵清和豆類植物的種子中都存在著蛋白酶抑制劑。zui近發(fā)現(xiàn)在一些植物的塊基(如土豆、白薯、芋頭等)中也存在有*抑制劑。
    *能催化蛋白質(zhì)的水解,對于由堿性氨基酸(*、賴氨酸)的羧基與其他氨基酸的氨基所形成的鍵具有高度的專一性。此外還能催化由堿性氨基酸和羧基形成的酰胺鍵或酯鍵,其高度專一性仍表現(xiàn)為對堿性氨基酸一端的選擇。*對這些鍵的敏感性次序?yàn)椋乎ユI> 酰胺鍵> 肽鍵。因此可利用含有這些鍵的酰胺或酯類化合物作為底物來測定*的活力。目前常用苯甲酰-L-*-對硝基苯胺(簡稱BAPA)和苯甲酰-L-*-β-萘酰胺(簡稱BANA)測定酰胺酶活力。用苯甲酰-L-*乙酯(簡稱BAEE)和對甲苯磺酰-L-*甲酯(簡稱TAME)測定酯酶活力。本實(shí)驗(yàn)以BAEE為底物,用紫外吸收法測定*活力。酶活力單位的規(guī)定常因底物及測定方法而異。 

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