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等孢球蟲通用PCR檢測試劑盒準備試劑與收集血樣

時間:2021/3/16閱讀:622
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等孢球蟲通用PCR檢測試劑盒準備試劑與收集血樣:
雙重核酸試劑盒(熒光PCR法) .  收集標本:血清、血漿(EDTA 、檸檬酸鹽、肝素抗凝)、細胞培養(yǎng)上清液、組織勻漿等盡早檢測, 2-8 ℃ 保存48 小時;更長時間須冷凍( -20   ℃或 -70   ℃ )保存,避免反復凍融。
2.  標準品液配制:使用前加入0.5ml 蒸餾水 混勻,配成 20 0ng/ml 的溶液 。 設標準 管 8 管,管加標本稀釋液 900ul ,第二至第八管加入標本稀釋液 500ul 。在管中加入 20 0ng/ml 的標準品溶液 00ul 混勻后用加樣器吸出 500ul ,移至第二管 。如此反復作對倍稀釋,從第七 管 中吸出 500ul 棄去。第八 管 為空白對照。
3.  0× 標本稀釋液用蒸餾水作 : 0 倍稀釋( 示例: ml濃稀釋液 +9ml 蒸餾水)。
4.  洗滌液:用重蒸水 :20 稀釋(示例:ml 濃縮洗滌液加入 9ml 的重蒸水)
檢測程序:
.  加樣:每孔各加入標準品或待測樣品 00ul ,將反應板充分混勻后置 37 ℃ 20 分鐘。
2.  洗板:用洗滌液將反應板充分洗滌 4-6 次,向濾紙上印干。
3.  每孔中加入抗體工作液0 0ul 。將反應板充分混勻后置 37 ℃ 6 0 分鐘。
4.  洗板:同前。
5.  每孔加酶標抗體工作液00ul 。將反應板置 37 ℃ 3 0 分鐘。
6.  洗板:同前。
7.  每孔加入底物工作液00ul ,置 37   ℃ 暗處反應5 分鐘。
8.  每孔加入00ul 終止液混勻。
9.  30分鐘內(nèi)用酶標儀在 45 0 nm 處測 吸光值。
 非特異產(chǎn)物及電泳呈涂布狀
.Mg2 濃度
2.調(diào)整引物、模板、聚合酶的用量
3.適當減少循環(huán)數(shù)
4.適當提高退火溫度,縮短退火或延伸時間

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