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標(biāo)準(zhǔn)品
培養(yǎng)基
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生物試劑
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urkat細(xì)胞(人外周血白血病T細(xì)胞)的傳代

時間:2014-11-5閱讀:1317
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urkat細(xì)胞(人外周血白血病T細(xì)胞),是一種懸浮細(xì)胞。我的經(jīng)驗如下:

1、培養(yǎng)液:RPMI1640,15%小牛血清,2%Na2CO3,1%HEPES,100IU/1ml,100IU/ml;

2、培養(yǎng)條件:5%CO2,37度,30%濕度;

3、細(xì)胞復(fù)蘇:要快速將凍存管放入37度水中,不斷輕輕搖晃,直到細(xì)胞*溶解,加入10ml左右的培養(yǎng)液,800~1000rpm,10分鐘離心,之后倒掉液體,加入新的培養(yǎng)基就可以進(jìn)行培養(yǎng)了;

4、細(xì)胞培養(yǎng):起初進(jìn)行傳代時由于細(xì)胞剛剛復(fù)蘇,長得比較慢,所以可以3~4天傳一代,傳過兩代后,一般2~3天傳一代,每次傳代后在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài),在傳過幾代合適的時候可以進(jìn)行實驗。

5、細(xì)胞凍存:1000rpm離心后,棄去液體,加入含有15%DMSO的凍存液,按下列順序降溫:室溫→4℃(20分鐘〕→冰箱冷凍室(30分鐘)→低溫冰箱(-80℃ 1小時)→液氮。

6、我在做細(xì)胞培養(yǎng)時的一些小經(jīng)驗:

(1)細(xì)胞培養(yǎng)箱在每使用1個月用酒精擦洗一次,這樣可以減少污染;

(2)雖然說加樣器放在紫外下照射會不準(zhǔn),但我們還是丟了一把1ml的加樣器在超凈臺,沒有拿出來過,我想這樣也許會減少污染;

(3)小牛血清我們用的是國產(chǎn)的,所以在一開始的時候加了15%的小牛血清,但細(xì)胞總是長不好,后來摸索條件,把小牛血清的量調(diào)到了20%,細(xì)胞生長旺盛;

(4)HEPES雖然貴點,但加上去后細(xì)胞會長的不錯;

(5)在超凈臺操作前要用0.1%的新潔爾滅或75%酒精擦手。

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