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中級會(huì)員 | 第14年

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標(biāo)準(zhǔn)品
培養(yǎng)基
培養(yǎng)基原料 霍亂弧菌診斷血清 大腸艾希氏菌診斷血清 志賀氏菌屬診斷血清 沙門氏菌屬診斷血清 標(biāo)準(zhǔn)血清,診斷血清 抗生素藥敏紙片 微生物配套試劑 微生物生化管 管裝培養(yǎng)基 即用型液體培養(yǎng)基 一次性培養(yǎng)基平板 顯色培養(yǎng)基 臨床培養(yǎng)基 菌種保存培養(yǎng)基 四環(huán)素檢定、厭氧亞硫酸鹽還原桿菌檢測培養(yǎng)基 維生素檢測培養(yǎng)基 一次性衛(wèi)生用品衛(wèi)生檢測培養(yǎng)基 罐頭食品商業(yè)無菌檢測培養(yǎng)基 飲用水及水源檢測培養(yǎng)基 藥品、生物制品檢測培養(yǎng)基 化妝品檢測培養(yǎng)基 動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)基 啤酒檢驗(yàn)培養(yǎng)基 軍團(tuán)菌檢測培養(yǎng)基 支原體檢測培養(yǎng)基 小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌檢驗(yàn)培養(yǎng)基 彎曲桿菌檢驗(yàn)培養(yǎng)基 產(chǎn)氣莢膜梭菌、肉毒梭菌、厭氧菌檢驗(yàn)培養(yǎng)基 阪崎腸桿菌檢驗(yàn)培養(yǎng)基 溶血性鏈球菌檢測培養(yǎng)基 李斯特氏菌檢測培養(yǎng)基 弧菌檢測培養(yǎng)基 乳酸菌、雙歧桿菌檢測培養(yǎng)基 酵母、霉菌檢測培養(yǎng)基 檢測培養(yǎng)基 沙門氏菌、志賀氏菌檢驗(yàn)培養(yǎng)基 大腸菌群、糞大腸菌群、大腸桿菌及腸桿菌科檢測培養(yǎng)基 細(xì)菌總數(shù)檢測,增菌培養(yǎng)基
抗體
生物試劑
細(xì)胞
菌株
血清
細(xì)胞分離試劑
試劑盒

原代細(xì)胞的培養(yǎng)和維持

時(shí)間:2014-11-24閱讀:630
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一、原代細(xì)胞的培養(yǎng)與維持

1、靜置貼壁細(xì)胞(包括半貼壁細(xì)胞的培養(yǎng))

凡經(jīng)消化液處理實(shí)體組織來源的細(xì)胞要通過充分漂洗,以盡量除去消化液的毒性,細(xì)胞接種時(shí)濃度要稍大一些,至少為5×108細(xì)胞/L,培養(yǎng)基可用Eagle(MEM)或DNEM培養(yǎng),小牛血清濃度為10%~80%。在起始的2天中盡量減少振蕩,以防止剛貼壁的細(xì)胞發(fā)生脫落,漂浮。

貼壁細(xì)胞長成網(wǎng)狀或基本單層時(shí),由于營養(yǎng)缺乏,代謝產(chǎn)物增多,pH變酸,不適宜細(xì)胞生長,此時(shí)細(xì)胞還未長成單層,未達(dá)到飽和密度,仍需繼續(xù)培養(yǎng),因此,需采取換液方式來更新營養(yǎng)成分以滿足細(xì)胞繼續(xù)生長繁殖的需要。其換液方法比較簡單,即棄去舊液,加入與原培養(yǎng)液相同的等量*培養(yǎng)基。

2、懸浮細(xì)胞的培養(yǎng)

凡來自外周血、胸腹水、脾臟、淋巴結(jié)、骨髓的淋巴細(xì)胞、造血干細(xì)胞以及白血病細(xì)胞,在原代培養(yǎng)時(shí)要盡量去除紅細(xì)胞。若要將淋巴細(xì)胞及白血病細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng),淋巴細(xì)胞中要加入生長因子,白血病細(xì)胞中要加入少量的原患者血清,以利細(xì)胞生長,待細(xì)胞開始增殖甚至結(jié)成小團(tuán)塊,培養(yǎng)基中pH變酸,說明細(xì)胞生長繁殖良好,一般每隔3天需半量換液一次(換液時(shí)盡量使細(xì)胞不丟失),待細(xì)胞增殖加快,濃度明顯增加,pH發(fā)生明顯變化時(shí),此時(shí)可考慮傳代。

懸浮細(xì)胞在未達(dá)到飽和密度時(shí),但培養(yǎng)基中的營養(yǎng)成分并不能維持細(xì)胞的營養(yǎng)需求時(shí),只能采用半量換液的方式。

二、原代細(xì)胞培養(yǎng)的傳代 (Subculture)

這種使原代細(xì)胞經(jīng)分散接種的過程稱之為傳代。每進(jìn)行一次分離再培養(yǎng)稱之為傳一代,傳至5~10代以內(nèi)的細(xì)胞通常稱為次代培養(yǎng)細(xì)胞,傳至10~20代以上的細(xì)胞,通常確定為傳代細(xì)胞(或稱傳代細(xì)胞系)。傳代細(xì)胞系的建立,關(guān)鍵是初代培養(yǎng)的傳代。應(yīng)注意如下幾點(diǎn):

(1)細(xì)胞生長密度不高時(shí),或未能達(dá)到覆蓋整個(gè)瓶底時(shí)不能急于傳代。

(2)原代培養(yǎng)的貼壁細(xì)胞多為混雜細(xì)胞,形態(tài)各異,往往是上皮樣細(xì)胞和成纖維樣細(xì)胞并存,采用消化時(shí)要掌握好消化時(shí)間,因成纖維細(xì)胞易于脫壁,上皮細(xì)胞不易脫壁,因此,可根據(jù)需要選用適當(dāng)?shù)南瘯r(shí)間及時(shí)中止消化。在早先傳代時(shí),其消化時(shí)間比一般已建系的細(xì)胞相對長一些。

(3)吹打已消化的細(xì)胞要輕巧,既不能聽到有明顯的吹打聲,又不能有大量泡沫在懸液中形成,以盡可能減少對細(xì)胞的機(jī)械損傷。

(4)傳代時(shí)細(xì)胞接種數(shù)量要多一些,以利于細(xì)胞的生存和繁殖。如果消化分離的細(xì)胞懸液有組織塊,也一并傳入到培養(yǎng)瓶,盡量減少細(xì)胞損失。

(5)傳代培養(yǎng)時(shí)的pH不能高,寧可偏低一些。此外,小牛血清濃度可適當(dāng)加大至15%~20%左右。

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