用51Cr鉻酸鈉標記靶細胞

時間：2016/11/7閱讀：1226

一、用51Cr鉻酸鈉標記靶細胞
短期標記法
1．用RPMI-1640培養(yǎng)液洗滌107靶細胞，去上清液。用0.5ml不含的*培養(yǎng)液懸浮細胞。加入100μCi（3.7MBq）51Cr鉻酸鈉，37℃水浴中標記1小時，每5～10分鐘搖晃一次，混勻細胞。
2．如上用RPMI-1640培養(yǎng)液洗滌細胞3次，每次400×g 10分鐘。用50ml RPMI-1640培養(yǎng)液懸浮細胞，置37℃水浴30分鐘，以減少非特異的自然釋放。
3．離心200×g 10分鐘，去上清液。小心用RPMI-1640培養(yǎng)液懸浮細胞，盡量減少振蕩引起的細胞損傷以降低靶細胞的自然釋放率，將細胞濃度調(diào)整為0.5×105或1×105/ml備用。

二、4小時51Cr釋放實驗
1．在96孔圓底細胞培養(yǎng)板中加入51Cr標記的靶細胞，每孔加100μl。
2．向各孔加100μl效應(yīng)細胞，效應(yīng)細胞與靶細胞的比例（效靶比，E：T）根據(jù)要求而定，通常為5：1～20：1。陰性對照孔（自然釋放）不加效應(yīng)細胞只加100μl*培養(yǎng)液，陽性對照孔（zui大釋放）中加100μ1％NP40（或2％SDS，1mol/L鹽酸）。每個實驗置三個復孔。
3．稍稍離心（100×g 3分鐘）后，置37℃ 5％ CO2的二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)4小時。
4．離心培養(yǎng)板200×g 10分鐘，每孔吸出100μl上清液置一次性使用的檢測管中，在γ－計數(shù)儀上（或液閃計數(shù)儀上）測定上清液中的每分鐘放射性活性（cpm值）。

3）特異性殺傷活性的計算
1．用細胞毒性百分比表示：細胞毒性（％）＝

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