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用51Cr鉻酸鈉標記靶細胞

時間:2016/11/7閱讀:1226
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一、用51Cr鉻酸鈉標記靶細胞 
短期標記法 
1.用RPMI-1640培養(yǎng)液洗滌107靶細胞,去上清液。用0.5ml不含的*培養(yǎng)液懸浮細胞。加入100μCi(3.7MBq)51Cr鉻酸鈉,37℃水浴中標記1小時,每5~10分鐘搖晃一次,混勻細胞。 
2.如上用RPMI-1640培養(yǎng)液洗滌細胞3次,每次400×g 10分鐘。用50ml RPMI-1640培養(yǎng)液懸浮細胞,置37℃水浴30分鐘,以減少非特異的自然釋放。 
3.離心200×g 10分鐘,去上清液。小心用RPMI-1640培養(yǎng)液懸浮細胞,盡量減少振蕩引起的細胞損傷以降低靶細胞的自然釋放率,將細胞濃度調(diào)整為0.5×105或1×105/ml備用。 

二、4小時51Cr釋放實驗 
1.在96孔圓底細胞培養(yǎng)板中加入51Cr標記的靶細胞,每孔加100μl。 
2.向各孔加100μl效應(yīng)細胞,效應(yīng)細胞與靶細胞的比例(效靶比,E:T)根據(jù)要求而定,通常為5:1~20:1。陰性對照孔(自然釋放)不加效應(yīng)細胞只加100μl*培養(yǎng)液,陽性對照孔(zui大釋放)中加100μ1%NP40(或2%SDS,1mol/L鹽酸)。每個實驗置三個復孔。 
3.稍稍離心(100×g 3分鐘)后,置37℃ 5% CO2的二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)4小時。 
4.離心培養(yǎng)板200×g 10分鐘,每孔吸出100μl上清液置一次性使用的檢測管中,在γ-計數(shù)儀上(或液閃計數(shù)儀上)測定上清液中的每分鐘放射性活性(cpm值)。 

3)特異性殺傷活性的計算 
1.用細胞毒性百分比表示:細胞毒性(%)=

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