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標(biāo)準(zhǔn)品
培養(yǎng)基
培養(yǎng)基原料 霍亂弧菌診斷血清 大腸艾希氏菌診斷血清 志賀氏菌屬診斷血清 沙門氏菌屬診斷血清 標(biāo)準(zhǔn)血清,診斷血清 抗生素藥敏紙片 微生物配套試劑 微生物生化管 管裝培養(yǎng)基 即用型液體培養(yǎng)基 一次性培養(yǎng)基平板 顯色培養(yǎng)基 臨床培養(yǎng)基 菌種保存培養(yǎng)基 四環(huán)素檢定、厭氧亞硫酸鹽還原桿菌檢測培養(yǎng)基 維生素檢測培養(yǎng)基 一次性衛(wèi)生用品衛(wèi)生檢測培養(yǎng)基 罐頭食品商業(yè)無菌檢測培養(yǎng)基 飲用水及水源檢測培養(yǎng)基 藥品、生物制品檢測培養(yǎng)基 化妝品檢測培養(yǎng)基 動物細(xì)胞培養(yǎng)基 啤酒檢驗培養(yǎng)基 軍團菌檢測培養(yǎng)基 支原體檢測培養(yǎng)基 小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌檢驗培養(yǎng)基 彎曲桿菌檢驗培養(yǎng)基 產(chǎn)氣莢膜梭菌、肉毒梭菌、厭氧菌檢驗培養(yǎng)基 阪崎腸桿菌檢驗培養(yǎng)基 溶血性鏈球菌檢測培養(yǎng)基 李斯特氏菌檢測培養(yǎng)基 弧菌檢測培養(yǎng)基 乳酸菌、雙歧桿菌檢測培養(yǎng)基 酵母、霉菌檢測培養(yǎng)基 檢測培養(yǎng)基 沙門氏菌、志賀氏菌檢驗培養(yǎng)基 大腸菌群、糞大腸菌群、大腸桿菌及腸桿菌科檢測培養(yǎng)基 細(xì)菌總數(shù)檢測,增菌培養(yǎng)基
抗體
生物試劑
細(xì)胞
菌株
血清
細(xì)胞分離試劑
試劑盒

巢式PCR與序列分析方法在確定HBV傳播途徑中的應(yīng)用

時間:2015/12/29閱讀:795
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1 材料與方法
1.1 研究對象 從1995年3月至1996年3月在湖南省某縣以HBsAg為指標(biāo)篩檢前來終止妊娠的孕婦及其配偶。選擇8名男性HBV攜帶者與其子宮內(nèi)受染有胎兒為研究對象。攜帶者以elisa檢測常規(guī)五項HBV血清學(xué)標(biāo)志與PCR檢測HBV DNA確定。均無既往肝炎史,谷丙轉(zhuǎn)氨酶正常,無乙肝疫苗注射史,年齡在25~35歲之間。8名配偶以上述方法檢測均無HBV感染,年齡在23~33歲之間。夫婦雙方血清、白細(xì)胞、精液在住院期間收集。取終止妊娠3月以上胎兒。胎兒血在產(chǎn)出當(dāng)時采取并分離血清保存于-20℃,同時分離白細(xì)胞。無菌條件下取肝臟組織。胎兒血清、白細(xì)胞、肝臟任何一項HBV DNA陽性者判定為子宮內(nèi)感染。另外選擇5對無HBV標(biāo)志的夫婦與胎兒為對照。
1.2 檢測方法
1.2.1 ELISA檢測HBV五項血清學(xué)標(biāo)志:HBsAg、HBeAg、抗-HBs、抗-HBe、抗-HBc。
1.2.2 各種標(biāo)本的處理及DNA的抽提 抗凝血液標(biāo)本以白細(xì)胞分離液分離白細(xì)胞并PBS反復(fù)洗滌以除去血液中HBV DNA的影響,恢復(fù)體積分小包裝低溫保存?zhèn)溆?;肝臟標(biāo)本取2g與PBS2ml在無菌研磨器中研磨成勻漿PBS反復(fù)洗滌后加PBS2ml后分小包裝低溫保存?zhèn)溆?;精液?biāo)本收集后離心將精子與精漿分開,精子以PBS反復(fù)洗滌以除去精漿中HBV DNA的影響,以PBS恢復(fù)體積分小包裝低溫保存?zhèn)溆?。上述?biāo)本末次洗液PCR檢測HBV DNA均陰性,各種標(biāo)本按常規(guī)以、氯仿、異戊醇法提取DNA[3]。
1.2.3 PCR技術(shù)檢測HBV DNA 引物合成于中科院上海細(xì)胞所。S區(qū)與C區(qū)各設(shè)計一對套式PCR引物(表1)。*輪PCR產(chǎn)物1∶50稀釋作為第二輪PCR的模板,每輪PCR均設(shè)陽、陰性對照與空白對照。常規(guī)PCR方法參考文獻[3]。
1.2.4 序列分析 取S區(qū)與C區(qū)第二輪PCR產(chǎn)物,以醋酸胺與異丙醇純化用Fmol DNA cycle sequencing system(promega公司)以雙脫氧鏈末端終止法測序[3]。r-32P-ATP購自北京亞輝公司。放射自顯影后讀片。結(jié)果輸入計算機用DNASIS軟件處理并與發(fā)表的序列(genebank)比較。

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