可溶性抗原與相應(yīng)抗體在半固體瓊脂凝膠內(nèi)擴(kuò)散，二者相遇，在比例合適處形成白色沉淀?；绢愋陀袉蜗驍U(kuò)散和雙向擴(kuò)散兩種。
(一)雙向瓊脂擴(kuò)散試驗(Double immunodiffusion test)
抗原和抗體加到瓊脂板上相對應(yīng)的孔中，兩者各自向四周擴(kuò)散，如兩者相對應(yīng)，濃度比例合適，則經(jīng)一定時間后，在抗原、抗體孔之間出現(xiàn)清晰致密的白色沉淀線。每一抗原與其相對應(yīng)抗體只能形成一條沉淀線，若同時含有若干對抗原抗體系統(tǒng)，因其擴(kuò)散速度的不同，可在瓊脂中出現(xiàn)多條沉淀線。且根據(jù)沉淀線融合情況，還可鑒定兩種抗原是*相同還是部分相同。所以，可用此法來分析和鑒定標(biāo)本中多種抗原或抗體成份，并用以測定抗原或抗體的效價。
【材料】羊抗人全血清，小牛血清，正常人混合血清，精制瓊脂粉，生理鹽水、載玻片，打孔器(直徑3mm)、濕盒、吸管等。

3、相應(yīng)抗原抗體所形成的沉淀線，如二者濃度相當(dāng)，沉淀線在孔，二者濃度不當(dāng)時，則沉淀線偏向濃度低的一側(cè)(圖2-3)

(二)單向瓊脂擴(kuò)散試驗(Single immunodiffusion test)—人血清中IgG、IgA、IgM的測定。

單向瓊脂擴(kuò)散試驗是一種定量試驗，將抗體混合于瓊脂內(nèi)，傾注于玻片或平皿上，凝固后在瓊脂上打孔，再將抗原標(biāo)本加入孔內(nèi)，經(jīng)過一定的時間，在孔的周圍出現(xiàn)抗原抗體復(fù)合物形成的沉淀環(huán)，環(huán)的大小與抗原含量和擴(kuò)散時間相關(guān)。用不同濃度的抗原制成標(biāo)準(zhǔn)曲線，則未知標(biāo)本中的抗原含量即可從準(zhǔn)標(biāo)曲線中求出。本試驗主要用于檢查血清中各種免疫球蛋白和補(bǔ)體成份的含量。

【材料】

IgG、IgA、IgM免疫板、參考血清、待檢血清、微量加樣器(10微升)、量尺、紗布、生理鹽水、帶蓋方盤。

【方法】

1、免疫瓊脂板制備：將1.5%瓊脂(用PH8.2、0.05M的緩沖液配成)，加熱溶化，待瓊脂冷至56℃加入適量抗血清(抗血清zui終稀釋度取決于抗血清所標(biāo)化的稀釋度)，混勻，制成厚1.5mm的瓊脂板，待瓊脂凝固后打孔，孔徑為3mm，孔距1～1.2cm。

2、稀釋參考血清及待檢血清：參考血清用0.5ml蒸餾水溶解后使用，參考血清、待檢血清稀釋按要求進(jìn)行。

【結(jié)果】免疫球蛋白的含量用mg/ml表示，不同批號的參考血清其免疫球蛋白含量不一。