一、基本原理
溶血空斑試驗(yàn)，又稱空斑形成細(xì)胞（Plague Forming Cell, PFC）試驗(yàn)，是一種體外檢測抗體形成細(xì)胞的方法。將一定量洗滌過的綿羊紅細(xì)胞注射入小鼠腹腔，四天后將小鼠殺死，取脾臟制成脾細(xì)胞懸液，內(nèi)含抗體形成細(xì)胞。然后將脾細(xì)胞、綿羊紅細(xì)胞，補(bǔ)體混合孵育。由于PFC所分泌的抗體和綿羊紅血球結(jié)合形成抗原抗體復(fù)合物，在補(bǔ)體作用下可使紅細(xì)胞溶解，于特制的小室內(nèi)形成肉眼可見的溶血空斑。一個(gè)空斑即代表一個(gè)抗體形成細(xì)胞。
二、實(shí)驗(yàn)材料
1. 解剖器械、試管、1ml吸量管
2. 載玻片、石蠟盤、酒精燈、微量加樣器
3. ICR小鼠（北京大學(xué)醫(yī)學(xué)部實(shí)驗(yàn)動物中心提供）
4. 5％和10％綿羊紅血球（SRBC）
5. 補(bǔ)體（豚鼠血清，經(jīng)SRBC吸收，臨用時(shí)稀釋成合適濃度）
三、實(shí)驗(yàn)方法
1. 小鼠免疫及脾細(xì)胞懸液的制備：
將5％SRBC （0.4ml）注射于小鼠腹腔，4天后拉脫頸椎處死，取出脾臟放在已加入6ml Hank’s液的平皿中。在100目不銹鋼網(wǎng)上研磨，過濾混勻，從中吸取lml加入試管中，加滿Hank’s液混勻，離心1000rpm，10分鐘。將沉淀的脾細(xì)胞恢復(fù)lml容積，即為約107／ml濃度的細(xì)胞懸液。
2．制作小室：
取無脂載玻片（75mm×25mm）, 平置桌面上。用雙面膠帶在載玻片兩端和中間各粘一條，然后再覆蓋上同樣的載玻片，即形成兩個(gè)小室。將此雙層玻片的一側(cè)長邊浸入融化的石臘池中以封閉小室的一邊（無需浸入過深，以能封閉小室邊緣為準(zhǔn)）。
2. 小室灌注細(xì)胞懸液：
取107／ml脾細(xì)胞懸液100ml
10％SRBC 200ml
補(bǔ)體 200ml
Hank’s液 1m1
混勻后，用尖吸管灌注小室、蠟封、標(biāo)記、平放于玻片盤內(nèi)，置37℃孵箱30—45分鐘。
四、實(shí)驗(yàn)結(jié)果
觀察小室內(nèi)的透明空斑，一個(gè)空斑即代表一個(gè)空斑形成細(xì)胞（PFC），即b細(xì)胞。
五、注意事項(xiàng)
（1） 小室注入液體時(shí)不要留有氣泡。
（2） 小室邊緣需用石蠟封嚴(yán)。
（3） 37℃孵箱孵育時(shí)，必須放平，不可傾斜。
（1） 觀察結(jié)果時(shí)，應(yīng)注意辨別空斑與氣泡的區(qū)別，避免將氣泡誤認(rèn)為溶血空斑。 一、基本原理
溶血空斑試驗(yàn)，又稱空斑形成細(xì)胞（Plague Forming Cell, PFC）試驗(yàn)，是一種體外檢測抗體形成細(xì)胞的方法。將一定量洗滌過的綿羊紅細(xì)胞注射入小鼠腹腔，四天后將小鼠殺死，取脾臟制成脾細(xì)胞懸液，內(nèi)含抗體形成細(xì)胞。然后將脾細(xì)胞、綿羊紅細(xì)胞，補(bǔ)體混合孵育。由于PFC所分泌的抗體和綿羊紅血球結(jié)合形成抗原抗體復(fù)合物，在補(bǔ)體作用下可使紅細(xì)胞溶解，于特制的小室內(nèi)形成肉眼可見的溶血空斑。一個(gè)空斑即代表一個(gè)抗體形成細(xì)胞。
二、實(shí)驗(yàn)材料
1. 解剖器械、試管、1ml吸量管
2. 載玻片、石蠟盤、酒精燈、微量加樣器
3. ICR小鼠（北京大學(xué)醫(yī)學(xué)部實(shí)驗(yàn)動物中心提供）
4. 5％和10％綿羊紅血球（SRBC）
5. 補(bǔ)體（豚鼠血清，經(jīng)SRBC吸收，臨用時(shí)稀釋成合適濃度）
三、實(shí)驗(yàn)方法
1. 小鼠免疫及脾細(xì)胞懸液的制備：
將5％SRBC （0.4ml）注射于小鼠腹腔，4天后拉脫頸椎處死，取出脾臟放在已加入6ml Hank’s液的平皿中。在100目不銹鋼網(wǎng)上研磨，過濾混勻，從中吸取lml加入試管中，加滿Hank’s液混勻，離心1000rpm，10分鐘。將沉淀的脾細(xì)胞恢復(fù)lml容積，即為約107／ml濃度的細(xì)胞懸液。
2．制作小室：
取無脂載玻片（75mm×25mm）, 平置桌面上。用雙面膠帶在載玻片兩端和中間各粘一條，然后再覆蓋上同樣的載玻片，即形成兩個(gè)小室。將此雙層玻片的一側(cè)長邊浸入融化的石臘池中以封閉小室的一邊（無需浸入過深，以能封閉小室邊緣為準(zhǔn)）。
2. 小室灌注細(xì)胞懸液：
取107／ml脾細(xì)胞懸液100ml
10％SRBC 200ml
補(bǔ)體 200ml
Hank’s液 1m1
混勻后，用尖吸管灌注小室、蠟封、標(biāo)記、平放于玻片盤內(nèi)，置37℃孵箱30—45分鐘。
四、實(shí)驗(yàn)結(jié)果
觀察小室內(nèi)的透明空斑，一個(gè)空斑即代表一個(gè)空斑形成細(xì)胞（PFC），即b細(xì)胞。
五、注意事項(xiàng)
（1） 小室注入液體時(shí)不要留有氣泡。
（2） 小室邊緣需用石蠟封嚴(yán)。
（3） 37℃孵箱孵育時(shí)，必須放平，不可傾斜。
（1） 觀察結(jié)果時(shí)，應(yīng)注意辨別空斑與氣泡的區(qū)別，避免將氣泡誤認(rèn)為溶血空斑。
