士鋒革蘭氏染色實(shí)驗(yàn)步驟

時(shí)間：2013/9/25閱讀：1050

一、目的和要求
1．了解革蘭氏染色法原理及其在細(xì)菌分類鑒定中的重要性。
2．掌握革蘭氏染色的基本步驟。

二、原理
G+、G-細(xì)菌的細(xì)胞壁成分和結(jié)構(gòu)不同。G+的CW主要有肽聚糖形成的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)組成，在染色過(guò)程中，當(dāng)用95%乙醇處理時(shí)，由于脫水而引起網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)中的孔徑變小，CW通透性降低，使結(jié)晶紫-碘復(fù)合物被保留在CW內(nèi)而不易脫色，因此呈藍(lán)紫色。G-的CW中肽聚糖含量低，脂類物質(zhì)含量高，當(dāng)用乙醇處理時(shí)，脂類物質(zhì)溶解，CW的通透性增加，使結(jié)晶紫-碘復(fù)合物容易被乙醇抽提出來(lái)而脫色，然后又被染上了復(fù)染劑的顏色，因此呈現(xiàn)紅色。

革蘭氏染色

三、菌種：大腸桿菌、
染液：革蘭氏染液

四、操作

革蘭氏染色

具體步驟
制片——固定——初染（結(jié)晶紫染液）1-2min——水洗——媒染（碘液）1min——水洗——脫色（95%乙醇至無(wú)色——水洗——復(fù)染（番紅或復(fù)紅染液）1-2min——水洗——干燥——鏡檢
革蘭氏染色的關(guān)鍵環(huán)節(jié)
涂片不宜過(guò)厚，以免脫色不*，造成假陽(yáng)性。
乙醇脫色時(shí)間
菌齡：應(yīng)選擇活躍生的幼培養(yǎng)物作革蘭氏染色。培養(yǎng)時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，或死亡及部分自溶，改變了細(xì)菌CW的通透性，造成陽(yáng)性菌的假陰性反應(yīng)。
火焰固定不宜過(guò)熱
媒染劑的作用
媒染劑的作用是增加染料和細(xì)胞之間的親和性或吸附力，即以某種方式幫助染料固定在細(xì)胞上，使之不易脫落。

五、實(shí)驗(yàn)報(bào)告
簡(jiǎn)述各菌株的染色結(jié)果，并分別繪圖示其形態(tài)特征。

六、預(yù)習(xí)
細(xì)菌的芽孢染色法

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