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腫瘤壞死因子檢測試劑盒進行實驗時有哪些條件選擇

閱讀:1099發(fā)布時間:2019-4-10

  腫瘤壞死因子檢測試劑盒中,進行各項實驗條件的選擇是很重要的,其中包括:
 
  1、固相載體的選擇:人腫瘤壞死因子α(TNFα)檢測試劑盒許多物質(zhì)可作為固相載體,如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等。其形式可以是凹孔平板、試管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何種載體,在使用前均可進行篩選:用等量抗原包被,在同一實驗條件下進行反應(yīng),觀察其顯色反應(yīng)是否均一性,據(jù)此判明其吸附性能是否良好。
 
  2、包被抗體(或抗原)的選擇:人腫瘤壞死因子α(TNFα)檢測試劑盒將抗體(或抗原)吸附在固相載體表面時,要求純度要好,吸附時一般要求PH在9.0~9.6之間。吸附溫度,時間及其蛋白量也有一定影響,一般多采用4℃18~24小時。蛋白質(zhì)包被的適濃度需進行滴定:即用不同的蛋白質(zhì)濃度(0.1、1.0和10μg/ml等)進行包被后,在其它試驗條件相同時,觀察陽性標本的OD值。選擇OD值*而蛋白量少的濃度。人腫瘤壞死因子α(TNFα)檢測試劑盒對于多數(shù)蛋白質(zhì)來說通常為1~10μg/ml。
 
  腫瘤壞死因子檢測試劑盒操作步驟:各試劑在使用前平衡至室溫。
 
  1、加樣:分別設(shè)空白孔、標準孔、待測樣品孔。除空白孔外,余孔分別加標準溶液或待測樣品100ul,注意不要有氣泡,輕輕混勻,酶標板加上蓋,37℃反應(yīng)120分鐘。
 
  2、棄去液體,甩干,不用洗滌。


腫瘤壞死因子檢測試劑盒

  3、每孔加檢測溶液A工作液 100ul,37℃,60分鐘。洗板3次,350ul/每孔,甩干。
 
  4、每孔加檢測溶液B工作液 100ul,37℃,60分鐘,洗板5次,甩干。
 
  5、依序每孔加底物溶液90ul,37℃避光顯色30分鐘(此時肉眼可見標準品的前3-4孔有明顯的梯度蘭色,后3-4孔梯度不明顯)。
 
  6、依序每孔加終止溶液50ul,終止反應(yīng)。用酶聯(lián)儀在450nm波長依序測量各孔的光密度(OD值)。

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