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上海邦景實(shí)業(yè)有限公司
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大鼠源細(xì)胞結(jié)果的判斷性
2020-10-14 閱讀(186)
大鼠源細(xì)胞試劑準(zhǔn)備：
1. 大鼠源細(xì)胞回溫：首先在實(shí)驗(yàn)前30 min將試劑盒，待測(cè)樣本放置于室溫下，濃縮洗滌液如出現(xiàn)結(jié)晶，請(qǐng)放入37℃溫浴直到結(jié)晶全部溶解。
2. 配制洗滌液：預(yù)先計(jì)算好稀釋后的洗滌液使用體積，然后用雙蒸水或去離子水將20倍濃縮洗滌液稀釋成1倍應(yīng)用液，未用完的濃縮洗滌液放入4℃冰箱保存。
3. 標(biāo)準(zhǔn)品梯度稀釋：加入標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液1ml至凍干標(biāo)準(zhǔn)品中，靜置15分鐘待其*溶解后輕輕混勻(濃度為5.5ng/ml)，然后按照以下濃度：5.5、2.75、1.375、0.687、0.343、0.171、0.085、0 ng/ml進(jìn)行稀釋。復(fù)溶過(guò)的標(biāo)準(zhǔn)品原液（5.5ng/ml）未用完的應(yīng)廢棄或根據(jù)需要按照一次用量分裝，并將其貯存在-20～-80℃冰箱。
大鼠源細(xì)胞檢測(cè)步驟：
1.通過(guò)計(jì)算并確定一次性實(shí)驗(yàn)所需的板條數(shù)，取出所需板條放置在框架內(nèi)，暫時(shí)用不到板條請(qǐng)放回鋁箔袋密封，保存于4℃。
2.建議設(shè)置本底較正孔，即空白孔,設(shè)置方法為該孔只加TMB顯色液和中止液。每次實(shí)驗(yàn)均需做標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)照并畫(huà)出標(biāo)準(zhǔn)曲線。
3.分別將標(biāo)本或不同濃度標(biāo)準(zhǔn)品(10ul/孔)加入相應(yīng)孔中，快速加入大鼠源細(xì)胞結(jié)合物(100ul/孔)。用封板膠紙封住反應(yīng)孔，室溫（25～28℃）孵育120分鐘。
4.洗板5次，且一次置厚吸水紙上拍干。
5.加入顯色劑TMB100ul/孔，避光室溫（25～28℃）孵育20分鐘。
6.加入終止液50ul/孔,混勻后即刻測(cè)量OD450值。
大鼠源細(xì)胞結(jié)果判斷：
1.復(fù)孔的值在20%的差異范圍內(nèi)結(jié)果才有效，復(fù)孔的值平均后可作為測(cè)量值。
2.每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品或標(biāo)本的OD值應(yīng)減去本底校正孔的OD值。
3.手工繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。以標(biāo)準(zhǔn)品濃度作橫坐標(biāo)，OD值作縱坐標(biāo)，以平滑線連接各大鼠源細(xì)胞標(biāo)準(zhǔn)品的坐標(biāo)點(diǎn)。通過(guò)標(biāo)本的OD值可在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出其濃度。
4.若標(biāo)本OD值高于標(biāo)準(zhǔn)曲線上限，應(yīng)適當(dāng)稀釋后重測(cè)，計(jì)算濃度時(shí)應(yīng)乘以稀釋倍數(shù)。
