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江蘇菲亞生物科技有限公司

微藻基因組提取的方法概述

時間:2017-1-16閱讀:501
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微藻基因組提取的方法主要有以下幾種:

1、采用CTAB法

2、收集藻體

3、液氮研磨

4、加入CTAB提取液

5、*抽提、乙醇沉淀

6、洗滌

   一般來說,液氮研磨是的方法。原因如下:

1、液氮冷凍使得藻體變脆,易于破碎。

2、液氮研磨的力度,一般不會對基因組DNA造成機械損傷。

3、在低溫下,各種酶包括核酸酶的活性較低,可以zui大程度防止核酸的降解,這點在制備RNA的時候,尤為重要。所以,在制備微藻基因組時,應該盡量用液氮研磨。

    當然,用液氮往往比較麻煩;并且有潛在的危險,所以在某些情況下,也可以用一些替代性的方法,主要分為三類:

*類、常溫研磨。即用玻璃勻漿器或者組織勻漿機來破碎細胞,但需要做一些與實驗來確定研磨的時間/力度。

第二類、酶解。即用針對于研究對象細胞壁成分的酶,來酶解細胞壁,進而達到破碎細胞的目的。常用的酶有果膠酶、纖維素酶、半纖維素酶、*、海螺酶、蝸牛酶以及DRISELASW 崩潰酶,同樣需要做預試驗確定酶的種類和用量,以及酶解時間。

第三類、使用強的裂解液。例如異硫氰酸胍等,經(jīng)過長時間浸泡,可以“溶解”藻細胞。

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