小鼠腎連蛋白(NPNT)ELISA試劑盒深圳子科生物技術原理:
(1). 抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標記。
(2). 結合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學活性。
(3). 酶標記的抗原或抗體既保留其免疫學活性,又保留酶的活性。
(4). 受檢標本與固相載體表面的抗原或抗體起反應。再加入酶標記的抗原或抗體,也通過反應而結合在固相載體上。
(5). 此時固相上的酶量與標本中受檢物質的量呈一定的比例。
(6). 加入酶反應的底物后,底物被酶催化成為有色產物,產物的量與標本中受檢物質的量直接相關,故可根據呈色的深淺進行定性或定量分析。測定方法具有很高的敏感度(pg-ng/ml水平),并且重復性好。以免疫學反應為基礎,將抗原、抗體的特異性反應與酶對底物的催化作用相結合起來的一種敏感性很高的試驗技術;
小鼠腎連蛋白(NPNT)ELISA試劑盒實驗測定具體步驟:
1.確定本次檢測所需的已包被抗體的酶標板孔數(shù)目,并增加 1 孔作為 TMB 空白顯色孔。 總數(shù)=樣品數(shù)+9;做雙份檢測時×2。其余重包裝好放如冰箱中。
2.將標準品各 0.1ml 依次加入一排 7 孔中,1 孔只加樣品稀釋液的作為零孔。對于血清、體液、 組織勻漿或細胞培養(yǎng)上清,直接加已用樣品稀釋液稀釋的樣品 100μ ι 。
3.酶標板加上蓋,37℃反應 90 分鐘。
4.反應后用自動洗板機吸去酶標板內的液體;或甩去酶標板內液體,再對著吸水紙拍幾下。 不洗。
5.將準備好的生物素抗體工作液按每孔 0.1ml 依次加入。(TMB 空白顯色孔除 外)。37℃反應 60 分鐘。
6. 0.01M TBS 或 0.01M PBS 洗滌 3 次,每次浸泡 1 分鐘左右。
7.將準備好的 ABC 工作液按每孔 0.1ml 依次加入(TMB 空白顯色孔除外)。37℃反應 30 分鐘。
8. 0.01M TBS 或 0.01M PBS 洗滌 5 次,每次浸泡 1-2 分鐘左右。
9.按每孔 90μ ι 依次加入已在 37℃平衡 30 分鐘的 TMB 顯色液,37℃避光反應 20-25 分鐘 (注意:顯色時間供參考,因用戶實驗室條件差異,顯色時間會有所不同。此時肉眼可 見標準品的前 3-4 孔有明顯的梯度藍色,后 3-4 孔差別不明顯)。
10.按每孔 0.1ml 依次加入 TMB 終止液,此時藍色立轉黃色。
11.用酶標儀在 450nm 測定 OD值。
實驗說明:
1.試劑盒保存:-20℃(較長時間不用時);2-8℃(頻繁使用時)。
2.濃洗滌液低溫保存會有鹽析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶。
3.中、英文說明書可能會有不一致之處,請以英文說明書為準。
4.剛開啟的酶聯(lián)板孔中可能會含有少許水樣物質,此為正?,F(xiàn)象,不會對實驗結果造成任何影響。
小鼠腎連蛋白(NPNT)ELISA試劑盒01182P Aspergillus flavus derived from ATCC® 9643™* 黃曲霉 ATCC® 9643™* 2株/包
01021P Aspergillus fumigatus derived from ATCC® 204305™* 煙曲霉 ATCC® 204305™* 2株/包
0245P Aspergillus niger derived from ATCC® 16888™* 黑曲霉 ATCC® 16888™* 2株/包
0500P Aspergillus niger derived from ATCC® 6275™* 黑曲霉 ATCC® 6275™* 2株/包
0177P Aspergillus oryzae derived from ATCC® 10124™* 米曲霉 ATCC®10124™* 2株/包
0532P Aspergillus ustus derived from ATCC® 10760™* 焦曲霉 ATCC® 10760™* 2株/包
01081P Aureobasidium pullulans var. melanigenum derived from ATCC® 15233™* 出芽短梗霉 ATCC® 15233™* 2株/包
0515P Bacillus atrophaeus derived from ATCC® 51189™* ATCC® 51189™* 2株/包
0953P Bacillus atrophaeus derived from ATCC® 9372™* ATCC® 9372™* 2株/包
01008P Bacillus badius derived from ATCC® 14574™* 栗褐芽胞桿菌 ATCC® 14574™* 2株/包
0998P Bacillus cereus derived from ATCC® 10876™* 蠟樣芽胞桿菌 ATCC® 10876™* 2株/包
0256P Bacillus cereus derived from ATCC® 11778™* 蠟樣芽胞桿菌 ATCC®11778™* 2株/包
0999P Bacillus cereus derived from ATCC® 13061™* 蠟樣芽胞桿菌 ATCC® 13061™* 2株/包
0200P Bacillus cereus derived from ATCC® 14579™* 蠟樣芽胞桿菌 ATCC®14579™* 2株/包
0509P Bacillus cereus derived from ATCC® 2™* 蠟樣芽胞桿菌 ATCC® 2™* 2株/包
0198P Bacillus cereus derived from ATCC® 33019™* 蠟樣芽胞桿菌 ATCC® 33019™* 2株/包
0330P Bacillus cereus derived from NCIMB 7464 蠟樣芽胞桿菌 NCIMB 7464 2株/包
0507P Bacillus circulans derived from ATCC® 4516™* 環(huán)狀芽胞桿菌 ATCC® 4516™* 2株/包
0140P Bacillus circulans derived from ATCC® 61™* 環(huán)狀芽胞桿菌 ATCC® 61™* 2株/包