牛膽囊收縮素A受體(CCKAR) ELISA試劑盒?品牌:子科生物ZIKER,美國(guó)R&D,美國(guó)immonoway,美國(guó)sciencell,德國(guó)IBL
?有效期: 4 個(gè)月(4℃);8 個(gè)月(-20℃)。
?保存方法: 2-8℃(頻繁使用時(shí)); -20℃(長(zhǎng)時(shí)間不用時(shí))。
?服務(wù):子科生物所有的elisa試劑盒均可免費(fèi)代測(cè),全程Elisa實(shí)驗(yàn)技術(shù)指導(dǎo)
ELISA結(jié)果判定常用的幾種方法
1) 目測(cè)定性法:加入底物經(jīng)酶解和終止反應(yīng)后,肉眼觀察陽(yáng)性孔顏色明顯深于(競(jìng)爭(zhēng)法則淺于)陰性對(duì)照;與陰性對(duì)照的顏色接近者,判定為陰性。
2) 以樣品孔的OD值大于陰性對(duì)照OD值+2~3SD,作為陽(yáng)性結(jié)果的閾值。
3) 以P/N值(陽(yáng)性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽(yáng)性;P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑;P/N小于1.5為陰性。
定量測(cè)定結(jié)果根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中待測(cè)物的含量。
牛膽囊收縮素A受體(CCKAR) ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)測(cè)定具體步驟:
1.確定本次檢測(cè)所需的已包被抗體的酶標(biāo)板孔數(shù)目,并增加 1 孔作為 TMB 空白顯色孔。 總數(shù)=樣品數(shù)+9;做雙份檢測(cè)時(shí)×2。其余重包裝好放如冰箱中。
2.將標(biāo)準(zhǔn)品各 0.1ml 依次加入一排 7 孔中,1 孔只加樣品稀釋液的作為零孔。對(duì)于血清、體液、 組織勻漿或細(xì)胞培養(yǎng)上清,直接加已用樣品稀釋液稀釋的樣品 100μ ι 。
3.酶標(biāo)板加上蓋,37℃反應(yīng) 90 分鐘。
4.反應(yīng)后用自動(dòng)洗板機(jī)吸去酶標(biāo)板內(nèi)的液體;或甩去酶標(biāo)板內(nèi)液體,再對(duì)著吸水紙拍幾下。 不洗。
5.將準(zhǔn)備好的生物素抗體工作液按每孔 0.1ml 依次加入。(TMB 空白顯色孔除 外)。37℃反應(yīng) 60 分鐘。
6. 0.01M TBS 或 0.01M PBS 洗滌 3 次,每次浸泡 1 分鐘左右。
7.將準(zhǔn)備好的 ABC 工作液按每孔 0.1ml 依次加入(TMB 空白顯色孔除外)。37℃反應(yīng) 30 分鐘。
8. 0.01M TBS 或 0.01M PBS 洗滌 5 次,每次浸泡 1-2 分鐘左右。
9.按每孔 90μ ι 依次加入已在 37℃平衡 30 分鐘的 TMB 顯色液,37℃避光反應(yīng) 20-25 分鐘 (注意:顯色時(shí)間供參考,因用戶實(shí)驗(yàn)室條件差異,顯色時(shí)間會(huì)有所不同。此時(shí)肉眼可 見(jiàn)標(biāo)準(zhǔn)品的前 3-4 孔有明顯的梯度藍(lán)色,后 3-4 孔差別不明顯)。
10.按每孔 0.1ml 依次加入 TMB 終止液,此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色。
11.用酶標(biāo)儀在 450nm 測(cè)定 OD值。
牛膽囊收縮素A受體(CCKAR) ELISA試劑盒40%丙烯酰胺溶液(40%Acrylamide Solution, AcryBis) 100ml
SDS-PAGE分離膠緩沖液(1.5mol/L,pH8.8) 100ml
SDS-PAGE上層膠緩沖液(0.5mol/L,pH6.8) 30ml
考馬斯亮藍(lán)快速染色液(Commassie Blue Fast Staining Solution) 70ml
二硫蘇糖醇儲(chǔ)存液(Dithiothreitol Solution,DTT Solution) 1ml
10%十二烷基硫酸鈉(10% SDS Solution) 30ml
曲拉通 X-114(Triton X-114) 100ml
丙烯酰胺(Acrylamide) 100g
甲叉雙丙烯酰胺(Bis-Acrylamide) 10g
30%丙烯酰胺溶液(30% Acrylamide Solution, AcryBis) 100ml
過(guò)硫酸銨(Ammonium Persulfate) 25g
蛋白質(zhì)分子量標(biāo)準(zhǔn)(Protein Marker) 20T
彩虹預(yù)染蛋白質(zhì)分子量標(biāo)準(zhǔn)(Prestained Protein Marker,Rainbow Marker) 20T
藍(lán)色預(yù)染蛋白質(zhì)分子量標(biāo)準(zhǔn)(Prestained Protein Marker,Blue Marker) 20T
十二烷基硫酸鈉(SDS) 100g
SDS-PAGE凝膠制備試劑盒 40-60
蛋白電泳上樣緩沖液(SDS-PAGE Loading Buffer, 5X) 0.5ml
Tris-甘氨酸蛋白電泳液(SDS-PAGE蛋白電泳液,SDS-PAGE Running Buffer,10X) 250ml
四甲基乙二胺(TEMED) 5ml
蛋白印跡轉(zhuǎn)膜電泳液(Western Blot Transfer Buffer,10X) 250ml
40%丙烯酰胺溶液(40%Acrylamide Solution, AcryBis) 100ml
SDS-PAGE分離膠緩沖液(1.5mol/L,pH8.8) 100ml
SDS-PAGE上層膠緩沖液(0.5mol/L,pH6.8) 30ml
考馬斯亮藍(lán)快速染色液(Commassie Blue Fast Staining Solution) 70ml
二硫蘇糖醇儲(chǔ)存液(Dithiothreitol Solution,DTT Solution) 1ml
10%十二烷基硫酸鈉(10% SDS Solution) 30ml
DMEM培養(yǎng)液(高糖)(DMEM Medium,High Glucose,Liquid) 500ml
DMEM培養(yǎng)基(高糖)(DMEM Medium,High Glucose,Powder) 10*1L
DMEM培養(yǎng)液(低糖)(DMEM Medium,Low Glucose,Liquid) 500ml
DMEM培養(yǎng)基(低糖)(DMEM Medium,Low Glucose,Powder) 1L
DMEM/F-12培養(yǎng)基(DMEM/F-12 Medium,Power) 1L
F-12營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)液(Ham)(F-12 Nutrient Mixtures, F-12 Medium,Liquid) 100ml
MEM培養(yǎng)液(MEM Medium,Liquid) 100ml
MEM培養(yǎng)基(MEM Medium,Powder) 1L
M199培養(yǎng)液 (Medium 199,Liquid) 100ml
RPMI-1640培養(yǎng)液 (RPMI-1640 Cell Culture Medium,Liquid) 500ml
RPMI-1640培養(yǎng)基 (RPMI Medium 1640,Powder) 10*1L
IMDM培養(yǎng)基(Iscove‘s Modified Dulbecco‘s Medium,IMDM Medium,Powder) 1L
新生牛血清(Newborn Calf Serum) 100ml
HAT培養(yǎng)基添加劑(HAT Supplement, 50X, Powder) 1 Vial