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小鼠β-骨膠原交聯(lián)(βCTx)ELISA檢測試劑盒

時間:2017-1-10閱讀:291
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小鼠β-骨膠原交聯(lián)(βCTx)ELISA檢測試劑盒

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樣品收集、處理及保存方法:
1、 血清:操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后,1000×g離心10分鐘將血紅細胞迅速小心地分離。
2、 血漿:EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。
3、 細胞上清液:1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
4、 組織勻漿:將組織加入適量理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘,取上清液。
5、 保存方法:如果樣品不立即使用,應(yīng)將其分成小部分-70℃保存,避免反復(fù)冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒,檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
 
小鼠β-骨膠原交聯(lián)(βCTx)ELISA檢測試劑盒操作注意事項:
1、 試劑應(yīng)按標簽說明書儲存,使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標準品應(yīng)丟棄,不可保存。
2、 實驗中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質(zhì)。
3、 不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。
4、 使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時,避免使用帶金屬部分的加樣器。
5、 使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。
6、 底物A應(yīng)揮發(fā),避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實驗完成后應(yīng)立即讀取OD值。
7、加入試劑的順序應(yīng)一致,以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時間一樣。
8、按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。

操作過程主要步驟總結(jié)如下:
稀釋--加樣--溫育--配液--洗滌--加酶--溫育--洗滌--顯色--終止--測定

詳細操作步驟如下:
1.  從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4℃。
2.  設(shè)置標準品孔和樣本孔,標準品孔各加不同濃度的標準品50μL;
3.  樣本孔先加待測樣本10μL,再加樣本稀釋液40μL;空白孔不加。 
4.  除空白孔外,標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標記的檢測抗體100μL,用封板膜封住反應(yīng)孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
5.  棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液,靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復(fù)洗板5次(也可用洗板機洗板)。
6.  每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。
7.  每孔加入終止液50μL,15min內(nèi),在450nm波長處測定各孔的OD值。

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