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小鼠凝血因子Ⅷ相關(guān)抗原(FⅧ-Ag)ELISA試劑盒

時(shí)間:2017-1-4閱讀:127
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小鼠凝血因子Ⅷ相關(guān)抗原(FⅧ-Ag)ELISA試劑盒

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小鼠凝血因子Ⅷ相關(guān)抗原(FⅧ-Ag)ELISA試劑盒ELISA試劑盒在它的研究、生產(chǎn)及使用中常常會(huì)碰到非特異性問題,子科生物技術(shù)部根據(jù)多年研發(fā)和臨床經(jīng)驗(yàn)總結(jié)如下:
1、試劑盒特異性因素 
1)固相載體的選擇。ELISA中常用的固相載體有微量滴定板、小珠和小試管三種,以微量滴定板zui為常見。它具有良好的吸附性能,孔底透明度高,空白值低,各板之間、同一板各孔之間性能相近。聚苯乙烯ELISA板由于原料的不同和制作工藝的差別,各產(chǎn)品的質(zhì)量差異很大。因此,在選擇試劑盒同時(shí)要對其使用的微孔板型號(hào)進(jìn)行認(rèn)證,評估。 
2)包被物的純度。在酶聯(lián)免疫測定尤其是間接ELISA中,試劑的特異性取決于使用抗原的純度。目前由于技術(shù)條件的限制,包被用抗原或抗體的純度不可能達(dá)到100%,所以有些非特異性顯色不可避免,只能盡可能提高純度,提高特異性。目前使用的包被抗原一般為合成多肽抗原。 
3)包被抗體的效價(jià)。具有高親和力和高特異性的包被抗體,是決定試劑特異性的重要方面。 
4 )封閉。是ELISA中重要的一步,目的是封閉固相載體表面尚未被所占據(jù)的空隙[2],減少后續(xù)步驟中非特異性蛋白的干擾。 
2、小鼠凝血因子Ⅷ相關(guān)抗原(FⅧ-Ag)ELISA試劑盒操作過程中的問題造成假陽性 
1)加樣 
對于間接ELISA標(biāo)本一般都要進(jìn)行稀釋,如果加樣不準(zhǔn)就會(huì)造成誤差,尤其當(dāng)稀釋倍數(shù)大時(shí),很小的誤差,會(huì)導(dǎo)致較大的相對誤差,使陰性(或弱陽性)標(biāo)本呈陽性(或陰性)。加樣時(shí)應(yīng)將所加物加在ELISA板孔的底部,避免加在孔壁上部,并注意不可濺出,不可產(chǎn)生氣泡。目前,大部分血站都已使用全自動(dòng)酶免加樣系統(tǒng)處理標(biāo)本,可較好地避免以上誤差。 
2)洗滌 
在ELISA中正確的洗滌是保證得到可重復(fù)結(jié)果的關(guān)健一步,應(yīng)引起操作者重視。無論是手工操作還是機(jī)器操作,得出不正確的結(jié)果常與不正確的洗滌有關(guān),ELISA就是靠洗滌來達(dá)到分離游離和結(jié)合的酶標(biāo)記物的目的。通過洗滌以消除殘留在板孔中沒能與固體抗原或抗體結(jié)合的物質(zhì),以及在反應(yīng)過程中非特異性吸附于固相載體的干擾物質(zhì)。 
3) 溫育 
每種試劑都有其佳反應(yīng)模式,其中溫度和溫育時(shí)間控制是重要因素。因孵育溫度高,反應(yīng)時(shí)間長,會(huì)造成整板本底高,陽性率高。溫育一般用濕盒或水浴,反應(yīng)板不宜疊放,以保證各板溫度都能迅速平衡,為避免蒸發(fā),板上應(yīng)加蓋。 
4)酶標(biāo)儀判讀 
作為記錄測定結(jié)果的儀器,酶標(biāo)儀的性能穩(wěn)定與否,決定結(jié)果的可靠度。首先酶標(biāo)儀應(yīng)定期進(jìn)行保養(yǎng),對濾光片要定期校正;其次酶標(biāo)儀波長設(shè)置要正確,使用雙波長,一個(gè)檢測波長,一個(gè)參比波長,以消除微孔板底部劃痕、不平、指印或液面高度差異造成的光干擾。此外,在用酶標(biāo)儀讀數(shù)時(shí)先擦試微孔板底部并壓平板條。由于各種酶標(biāo)儀性能有所不同。 

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