小鼠磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶1(PCK1)ELISA檢測試劑盒子科生物ZIKER

試劑盒組成及試劑配制
1. 酶聯(lián)板（Assay plate ）：一塊（96孔）。
2. 標(biāo)準(zhǔn)品（Standard）：2瓶（凍干品）。
3. 樣品稀釋液（Sample Diluent）：1×20ml/瓶。
4. 生物素標(biāo)記抗體稀釋液（Biotin-antibody Diluent）：1×10ml/瓶。
5. 辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素稀釋液 （HRP-avidin Diluent）：1×10ml/瓶。
6. 生物素標(biāo)記抗體（Biotin-antibody）：1×120μl/瓶（1：100）
7. 辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素（HRP-avidin）：1×120μl/瓶（1：100）
8. 底物溶液（TMB Substrate）：1×10ml/瓶。
9. 濃洗滌液（Wash Buffer）：1×20ml/瓶，使用時每瓶用蒸餾水稀釋25倍。
10. 終止液（Stop Solution）：1×10ml/瓶（2N H2SO4）。

小鼠磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶1(PCK1)ELISA檢測試劑盒實驗原理
用純化的抗體包被微孔板，制成固相載體，往包被抗該指標(biāo)抗體的微孔中依次加入標(biāo)本或標(biāo)準(zhǔn)品、生物素化的抗該指標(biāo)抗體、HRP標(biāo)記的親和素，經(jīng)過*洗滌后用底物TMB顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的該指標(biāo)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），計算樣品濃度。

標(biāo)本的采集及保存
1. 血清：全血標(biāo)本請于室溫放置2小時或4℃過了夜后于1000 x g離心20分鐘，取上清即可檢測，或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
2.血漿：可用EDTA或肝素作為抗凝劑，標(biāo)本采集后30分鐘內(nèi)于2 - 8° C 1000 x g離心15分鐘，或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
3.細(xì)胞培養(yǎng)物上清或其它生物標(biāo)本：1000 x g離心20分鐘，取上清即可檢測，或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
注：標(biāo)本溶血會影響zui后檢測結(jié)果，因此溶血標(biāo)本不宜進(jìn)行此項檢測。

標(biāo)本的稀釋原則：
首先通過文獻(xiàn)檢索的方式了解待測樣本的大致含量，確定適當(dāng)?shù)南♂尡稊?shù)。只有稀釋至標(biāo)準(zhǔn)曲線的范圍內(nèi)，檢測的結(jié)果才是準(zhǔn)確的。稀釋的過程中，應(yīng)做好詳細(xì)的記錄。zui后計算濃度時，稀釋了“N”倍，標(biāo)本的濃度應(yīng)再乘以“N”。

小鼠磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶1(PCK1)ELISA檢測試劑盒操作步驟
實驗開始前，請?zhí)崆芭渲煤盟性噭?，試劑或樣品稀釋時，均需混勻，混勻時盡量避免起泡。每次檢測都應(yīng)該做標(biāo)準(zhǔn)曲線。如樣品濃度過高時，用樣品稀釋液進(jìn)行稀釋，以使樣品符合試劑盒的檢測范圍。
1. 加樣：分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔?？瞻卓准訕悠废♂屢?00μl，余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測樣品100μl，注意不要有氣泡，加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻，酶標(biāo)板加上蓋或覆膜，37℃反應(yīng)120分鐘。
為保證實驗結(jié)果有效性，每次實驗請使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。
2.棄去液體，甩干，不用洗滌。每孔加生物素標(biāo)記抗體工作液 100μl（取1μl生物素標(biāo)記抗體加99μl生物素標(biāo)記抗體稀釋液的比例配制，輕輕混勻，在使用前一小時內(nèi)配制），37℃,60分鐘。
3. 溫育60分鐘后，棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分鐘，350μl/每孔，甩干。
4.每孔加辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素工作液（同生物素標(biāo)記抗體工作液） 100μl，37℃，60分鐘。
5. 溫育60分鐘后，棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分鐘，350μl/每孔，甩干。
6. 依序每孔加底物溶液90μl，37℃避光顯色（30分鐘內(nèi)，此時肉眼可見標(biāo)準(zhǔn)品的前3-4孔有明顯的梯度藍(lán)色，后3-4孔梯度不明顯，即可終止）。
7.依序每孔加終止溶液50μl，終止反應(yīng)（此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性，底物反應(yīng)時間到后應(yīng)盡快加入終止液。
8. 用酶聯(lián)儀在450nm波長依序測量各孔的光密度（OD值）。 在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行檢測。

小鼠磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶1(PCK1)ELISA檢測試劑盒相關(guān)產(chǎn)品如下：

ZIKER0172    空腸彎曲桿菌/空腸彎曲菌    ATCC 33291    2支    美國 MBL
ZIKER0175    溶組織梭菌Clostridium histolyticum     ATCC 19401    2支    美國 MBL
ZIKER0176    敗毒梭菌Clostridium septicum    ATCC 12464    2支    美國 MBL
ZIKER0177    艱難梭菌Clostridium difficile     ATCC 9689    2支    美國 MBL
ZIKER0178    破傷風(fēng)桿菌/梭菌Clostridium tetani     ATCC 19406    2支    美國 MBL
ZIKER0179    艱難梭菌    ATCC 700057     1PK/包    美國 MBL
ZIKER0180    艱難梭菌    ATCC 43593     1PK/包    美國 MBL
ZIKER0181    不動桿菌屬    ATCC 10153     1PK/包    美國 MBL
ZIKER0182    枯灰青霉    ATCC DUMC 135.02     1PK/包    美國 MBL
ZIKER0183    長灘軍團(tuán)菌    ATCC 33462 1PK/包    1PK/包    美國 MBL
ZIKER0184    腦膜炎奈瑟菌    ATCC 13113     1PK/包    美國 MBL
ZIKER0185    栗褐芽孢桿菌    ATCC 14574     1PK/包    美國 MBL
ZIKER0186    百日咳鮑特氏菌    ATCC 9340     1PK/包    美國 MBL
ZIKER0187    拜氏接合酵母    ATCC MYA-4549     1PK/包    美國 MBL
ZIKER0188    日本克勒克酵母     ATCC 58370     1PK/包    美國 MBL
ZIKER0189    馬鏈球菌獸疫亞種    ATCC 43079     1PK/包    美國 MBL
ZIKER0190    嗜麥芽窄食單胞菌    ATCC 13636     1PK/包    美國 MBL
ZIKER0191    煙曲霉    ATCC 204305     1PK/包    美國 MBL
ZIKER0192    大腸彎曲菌    ATCC 33559     1PK/包    美國 MBL
ZIKER0193    兩岐雙岐桿菌    ATCC 11863     1PK/包    美國 MBL
ZIKER0194    致黑脫硫腸狀菌    ATCC 7946      1PK/包    美國 MBL
ZIKER0195    栗褐芽孢桿菌    ATCC 14574     6PK/罐    美國 MBL