小鼠安定結(jié)合抑制因子(DBI)ELISA試劑盒深圳子科生物ELISA試劑盒供應(yīng)商,擁有多年的研發(fā)和生產(chǎn)經(jīng)驗,擁有*的儀器設(shè)備,專業(yè)的技術(shù)人員和*的實驗技術(shù),目前已經(jīng)建立強大的實驗技術(shù)服務(wù)平臺,品牌設(shè)立為:ZIKER 。
完整的小鼠安定結(jié)合抑制因子(DBI)ELISA試劑盒包含以下各組分:
1、已包被抗原或抗體的固相載體(免疫吸附劑);
2、酶標記的抗原或抗體(結(jié)合物);
3、酶的底物;
4、陰性對照品和陽性對照品(定性測定中),參考標準品和控制血清(定量測定中);
5、結(jié)合物及標本的稀釋液;
6、洗滌液,在板式ELISA中,常用的稀釋液為含0.05%吐溫20磷酸緩沖鹽水;
酶反應(yīng)終止液,常用的HRP反應(yīng)終止液為硫酸,其濃度按加量及比色液的zui終體積而異,在板式ELISA中一般采用2mol/L。
小鼠安定結(jié)合抑制因子(DBI)ELISA試劑盒實驗的原理似乎很簡單,不外乎固定抗原,添加一抗、二抗和底物,間中夾雜著洗滌和封閉。然而,即使是平淡無奇的洗滌和封閉,如果做得不太好,也有可能毀了整個實驗。在實驗結(jié)束時,我們是否能獲得有意義的信息,這在很大程度上取決于結(jié)果的信噪比。背景噪音會影響您對結(jié)果的判斷。如何降低ELISA的背景,下面有一些tips。
洗滌很重要
洗滌步驟看似很無聊,其實很重要,因為如果未結(jié)合的材料(如非特異結(jié)合的抗體或檢測試劑)殘留在微孔板中,那么它會增加背景噪音。如有必要,可增加洗滌液中的鹽濃度,這會阻止非特異結(jié)合反應(yīng)。如果背景過高,而您懷疑洗滌不夠時,可以嘗試增加洗滌次數(shù)。
封閉更關(guān)鍵
封閉液的作用是讓不相關(guān)的蛋白占據(jù)微孔板中潛在的結(jié)合位點。這就降低了可產(chǎn)生信號的抗體非特異結(jié)合的機會。您當(dāng)然也希望抗體只與目的蛋白結(jié)合吧。如果您的背景過高,懷疑封閉不充分,那么您可以嘗試使用更高濃度的封閉液,或適當(dāng)延長封閉時間。
如果您一直被背景問題所困擾,那么也許您該花些時間來優(yōu)化封閉液。這可能需要時間,但也是值得的。目前主要有兩種類型的封閉液:蛋白和非離子型去污劑。您使用的類型須取決于多個因素,包括微孔板的表面試劑、吸附的抗原、您的抗體和檢測試劑。好的封閉液應(yīng)降低非特異性結(jié)合,但它不應(yīng)當(dāng)與抗原、抗體或檢測試劑發(fā)生相互作用。
zui常用的非離子型去污劑是Tween-20。這種封閉液便宜、穩(wěn)定,在去除洗滌過程中的一些非特異結(jié)合上很有用。但它們只在存在時起作用,因為很容易被洗掉。因此所有洗滌液中也必須添加封閉液。請勿使用高濃度(正常濃度為0.01-0.1%),它會降低特異結(jié)合,產(chǎn)生假陰性。另一個選擇是使用蛋白和非離子型去污劑這兩種封閉液,后者可協(xié)助洗滌過程中的封閉。
蛋白封閉液則有所不同,是*的。它們與開放位點結(jié)合并封閉,同時穩(wěn)定與微孔板結(jié)合的抗原分子。常用的蛋白封閉液包括牛血清白蛋白(BSA)、脫脂奶粉、正常血清和魚明膠。血清組分的內(nèi)在多樣性可使它有效攔截許多不同類型的分子相互作用。不過,它的缺點在于能與Protein A和IgG抗體相互作用。解決這個問題的一種方法是使用雞或魚的正常血清。
抗體濃度須優(yōu)化
我們通常會記錄每次試驗留下來的操作步驟,但是如果試劑稍有不同,則可能需要優(yōu)化抗體的量。記住,非特異的抗體結(jié)合會增加背景。為了防止這一點,切勿使用過多的一抗或二抗。
檢測試劑要適量
另一點也很顯而易見:切勿使用過多的檢測試劑。如果濃度過高,或者未正確稀釋,則會導(dǎo)致高背景。也不要顯色過度,如有必要,優(yōu)化一下何時應(yīng)加入終止液。
如果您的ELISA不幸地遇到了高背景,那么也無需太擔(dān)心,依次查看ELISA系統(tǒng)中的組分,并排除可能存在的問題。悉心優(yōu)化,相信很快就會有漂亮的結(jié)果。
小鼠安定結(jié)合抑制因子(DBI)ELISA試劑盒0596P Bacillus coagulans derived from ATCC® 7050™* 凝固芽胞桿菌 ATCC® 7050™* 2株/包
0812P Bacillus licheniformis derived from ATCC® 12759™* 地衣芽孢桿菌 ATCC®12759™* 2株/包
0799P Bacillus licheniformis derived from ATCC® 14580™* 地衣芽孢桿菌 ATCC® 14580™* 2株/包
0201P Bacillus megaterium derived from ATCC® 14581™* 巨大芽胞桿菌 ATCC® 14581™* 2株/包
0116P Bacillus megaterium derived from ATCC® 9885™* 巨大芽胞桿菌 ATCC® 9885™* 2株/包
0258P Bacillus pumilus derived from ATCC® 14884™* 短小芽胞桿菌 ATCC® 14884™* 2株/包
0577P Bacillus pumilus derived from ATCC® 700814™* 短小芽胞桿菌 ATCC® 700814™* 2株/包
0474P Bacillus pumilus derived from ATCC® BAA-1434™* 短小芽胞桿菌 ATCC® BAA-1434™* 2株/包
0269P Bacillus subtilis derived from ATCC® 11774™* 枯草芽孢桿菌 ATCC® 11774™* 2株/包
0540P Bacillus subtilis derived from ATCC® 19659™* 枯草芽孢桿菌 ATCC® 19659™* 2株/包
0486P Bacillus subtilis subsp. spizizenii derived from ATCC® 6633™* 枯草芽孢桿菌 ATCC®6633™* 2株/包
0582P Bacillus subtilis subsp. spizizenii derived from NCIMB 8054 枯草芽孢桿菌 NCIMB 8054 2株/包
0120P Bacillus subtilis subsp. subtilis derived from ATCC® 6051™* 枯草芽孢桿菌 ATCC® 6051™* 2株/包
0270P Bacillus thuringiensis derived from ATCC® 10792™* 蘇云金芽孢桿菌 ATCC® 10792™* 2株/包
0539P Bacillus thuringiensis derived from ATCC® 33679™* 蘇云金芽孢桿菌 ATCC® 33679™* 2株/包
0940P Bacteroides fragilis derived from ATCC® 23745™* 脆弱擬桿菌 ATCC® 23745™* 2株/包
0320P Bacteroides fragilis derived from ATCC® 25285™* 脆弱擬桿菌 ATCC®25285™* 2株/包
0358P Bacteroides fragilis derived from NCTC 9343 脆弱擬桿菌 NCTC 9343 2株/包
0400P Bacteroides ovatus derived from ATCC® 8483™* 卵形擬桿菌 ATCC®8483™* 2株/包
0585P Bacteroides ovatus derived from ATCC® BAA-1296™* 卵形擬桿菌 ATCC® BAA-1296™* 2株/包
0587P Bacteroides ovatus derived from ATCC® BAA-1304™* 卵形擬桿菌 ATCC® BAA-1304™* 2株/包
0319P Bacteroides thetaiotaomicron derived from ATCC® 29741™* 多形擬桿菌 ATCC®29741™* 2株/包
0619P Bacteroides uniformis derived from ATCC® 8492™* 單形擬桿菌 ATCC®8492™* 2株/包
0908P Bacteroides ureolyticus derived from ATCC® 33387™* 解脲擬桿菌 ATCC®33387™* 2株/包
0848P Bacteroides vulgatus derived from ATCC® 29327™* 普通擬桿菌 ATCC® 29327™* 2株/包
0445P Bacteroides vulgatus derived from ATCC® 8482™* 普通擬桿菌 ATCC®8482™* 2株/包