牛巨噬細(xì)胞炎性蛋白3α(MIP3α) ELISA試劑盒樣本收集使用注意事項(xiàng):
●每個(gè)標(biāo)本量收集體積= 100ul × 檢測(cè)種類,如要做復(fù)孔,標(biāo)本量收集體積= 100ul × 檢測(cè) 種類×2 。
● 對(duì)于作某一個(gè)具體指標(biāo)來說,先用一系列稀釋度作一批標(biāo)本測(cè)定,得出對(duì)實(shí)驗(yàn)有意義 的一個(gè)稀釋度(即測(cè)定劑量反應(yīng)曲線),然后用一個(gè)zui適稀釋度測(cè)定即可。
● 收集標(biāo)本前必須清楚要檢測(cè)的成份是否足夠穩(wěn)定。對(duì)收集后當(dāng)天進(jìn)行檢測(cè)的標(biāo)本,儲(chǔ)存在 4 ℃ 備用,如有特殊原因需要周期收集標(biāo)本,將標(biāo)本及時(shí)分裝后放在 -20 ℃ 或 -70 ℃ 條 件下保存。避免反復(fù)凍融。標(biāo)本 2 -8 ℃ 可保存 48 小時(shí), -20 ℃ 可保存 1 個(gè)月。 -70 度 可保存 6 個(gè)月。部分激素類標(biāo)本需添加抑肽酶。
● 血清標(biāo)本采集時(shí),應(yīng)注意避免溶血,紅細(xì)胞溶解時(shí)會(huì)釋放出具有過氧化物酶活性的物質(zhì), 以 HRP 為標(biāo)記的 ELISA 測(cè)定中,溶血標(biāo)本可能會(huì)增加非特異性顯色。
●為了保證尿液檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性,必須正確收集尿液標(biāo)本和保存。盛尿容器要清潔干燥。 使用一次性的容器(如塑料尿杯),避免因用藥并清洗不干凈而造成的污染,影響檢 測(cè)結(jié)果。尿液標(biāo)本必須新鮮,留取后,應(yīng)及時(shí)檢測(cè)或保存,以免細(xì)菌繁殖。因在室溫中久 置后(尤其是夏季)尿中磷酸鹽等可析出結(jié)晶而干擾檢測(cè)。
● 標(biāo)本宜在新鮮時(shí)檢測(cè)。如有細(xì)菌污染,菌體中可能含有內(nèi)源性 HRP,也會(huì)產(chǎn)生假陽(yáng)性反應(yīng)。 保存過久可發(fā)生聚合在 ELISA 中可使本底加深。
● 凍結(jié)標(biāo)本融解后,蛋白質(zhì)局部濃縮,分布不均,應(yīng)充分混勻宜輕緩,避免氣泡,可上下顛 倒混和,不要在混勻器上強(qiáng)烈振蕩。
● 混濁或有沉淀的標(biāo)本應(yīng)先離心或過濾,澄清后再檢測(cè)。
● 反復(fù)凍融會(huì)使蛋白效價(jià)降低,所以待測(cè)標(biāo)本如需保存作多次檢測(cè),宜少量分裝冰存。也可 加入適當(dāng)防腐劑。
● 如果您在實(shí)驗(yàn)中遇到任何特殊問題,敬請(qǐng)咨詢我公司深圳子科生物技術(shù)部。
牛巨噬細(xì)胞炎性蛋白3α(MIP3α) ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)測(cè)定具體步驟:
1.確定本次檢測(cè)所需的已包被抗體的酶標(biāo)板孔數(shù)目,并增加 1 孔作為 TMB 空白顯色孔。 總數(shù)=樣品數(shù)+9;做雙份檢測(cè)時(shí)×2。其余重包裝好放如冰箱中。
2.將標(biāo)準(zhǔn)品各 0.1ml 依次加入一排 7 孔中,1 孔只加樣品稀釋液的作為零孔。對(duì)于血清、體液、 組織勻漿或細(xì)胞培養(yǎng)上清,直接加已用樣品稀釋液稀釋的樣品 100μ ι 。
3.酶標(biāo)板加上蓋,37℃反應(yīng) 90 分鐘。
4.反應(yīng)后用自動(dòng)洗板機(jī)吸去酶標(biāo)板內(nèi)的液體;或甩去酶標(biāo)板內(nèi)液體,再對(duì)著吸水紙拍幾下。 不洗。
5.將準(zhǔn)備好的生物素抗體工作液按每孔 0.1ml 依次加入。(TMB 空白顯色孔除 外)。37℃反應(yīng) 60 分鐘。
6. 0.01M TBS 或 0.01M PBS 洗滌 3 次,每次浸泡 1 分鐘左右。
7.將準(zhǔn)備好的 ABC 工作液按每孔 0.1ml 依次加入(TMB 空白顯色孔除外)。37℃反應(yīng) 30 分鐘。
8. 0.01M TBS 或 0.01M PBS 洗滌 5 次,每次浸泡 1-2 分鐘左右。
9.按每孔 90μ ι 依次加入已在 37℃平衡 30 分鐘的 TMB 顯色液,37℃避光反應(yīng) 20-25 分鐘 (注意:顯色時(shí)間供參考,因用戶實(shí)驗(yàn)室條件差異,顯色時(shí)間會(huì)有所不同。此時(shí)肉眼可 見標(biāo)準(zhǔn)品的前 3-4 孔有明顯的梯度藍(lán)色,后 3-4 孔差別不明顯)。
10.按每孔 0.1ml 依次加入 TMB 終止液,此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色。
11.用酶標(biāo)儀在 450nm 測(cè)定 OD值。
牛巨噬細(xì)胞炎性蛋白3α(MIP3α) ELISA試劑盒CM0655B 軍團(tuán)菌CYE瓊脂基礎(chǔ)
CM0657B 橙血清瓊脂
CM0669B 增菌肉湯
CM0671B 連四硫酸鹽肉湯(美國(guó)配方)
CM0681B 牛奶平板計(jì)數(shù)瓊脂
CM0689B 彎曲桿菌瓊脂基礎(chǔ)
CM0691B
CM0695B
CM0699B 亞硒酸胱氨酸肉湯
CM0701B K-F鏈球菌瓊脂基礎(chǔ)
CM0727B DRBC瓊脂基礎(chǔ)
CM0729B (DG18)瓊脂基礎(chǔ)
CM0731B 曲霉瓊脂基礎(chǔ)
CM0733B zui大修復(fù)稀釋液
CM0739B 無血彎曲桿菌選擇性瓊脂基礎(chǔ) CM1183B
CM0755B GBS瓊脂基礎(chǔ)
CM0777B Raka-Ray培養(yǎng)基
CM0783B MLGB瓊脂
CM0785B M17瓊脂
CM0793B Tergitol-7瓊脂基礎(chǔ)(Tergitol-7 Agar Base)
CM0813B 山梨醇麥康凱瓊脂
CM0817B M17肉湯
CM0833B 氣單胞菌培養(yǎng)基基礎(chǔ)
CM0839B
CM0843B
CM0853B EC肉湯
CM0854B 綿羊血瓊脂基礎(chǔ)
CM0856B Oxford李斯特菌選擇性瓊脂基礎(chǔ)
CM0857B 沙門氏菌快速檢測(cè)選擇性培養(yǎng)基
CM0862B 李斯特菌增菌肉湯
CM0863B UVM李斯特菌增菌肉湯基礎(chǔ)
CM0866B 大豆蛋白胨肉湯(RVS)
CM0868B 疊氮葡萄糖肉湯(羅泰肉湯)
CM0877B PALCAM瓊脂基礎(chǔ)
CM0881B STA瓊脂基礎(chǔ)
CM0882B
CM0888B 膽鹽七葉苷瓊脂
CM0895B Fraser肉湯基礎(chǔ)
CM0897B 緩沖李斯特菌增菌肉湯
CM0898B HTM基礎(chǔ)HTM Base
CM0906B R2A瓊脂
CM0910B MSRV培養(yǎng)基基礎(chǔ)
CM0919B
CM0920B 酵母霉菌瓊脂
CM0927B
CM1185B MYP瓊脂基礎(chǔ)
CM0930B
CM0931B
CM0933B
CM0935B Karmali彎曲桿菌瓊脂基礎(chǔ)
CM0944B