小鼠腎素(Renin)ELISA試劑盒標(biāo)本類(lèi)型
ELISA 常見(jiàn)的標(biāo)本一般包括:
● 液體類(lèi)標(biāo)本:包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清等。
● 培養(yǎng)細(xì)胞
● 組織標(biāo)本
這些標(biāo)本收集的時(shí)間、方法和保存都有一定的要求。
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小鼠腎素(Renin)ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)原理:用純化的抗體包被微孔板,制成固相載體,往包被抗該指標(biāo)抗體的微孔中依次加入標(biāo)本或標(biāo)準(zhǔn)品、生物素化的抗該指標(biāo)抗體、HRP標(biāo)記的親和素,經(jīng)過(guò)*洗滌后用底物TMB顯色。TMB在過(guò)氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的該指標(biāo)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD值),計(jì)算樣品濃度。
標(biāo)本的采集及保存:
1. 血清:全血標(biāo)本請(qǐng)于室溫放置2小時(shí)或4℃過(guò)了夜后于1000 x g離心20分鐘,取上清即可檢測(cè),或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
2.血漿:可用EDTA或肝素作為抗凝劑,標(biāo)本采集后30分鐘內(nèi)于2 - 8° C 1000 x g離心15分鐘,或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
3.細(xì)胞培養(yǎng)物上清或其它生物標(biāo)本:1000 x g離心20分鐘,取上清即可檢測(cè),或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
注:標(biāo)本溶血會(huì)影響zui后檢測(cè)結(jié)果,因此溶血標(biāo)本不宜進(jìn)行此項(xiàng)檢測(cè)。
小鼠腎素(Renin)ELISA試劑盒操作步驟
1、 取出試劑盒,于室溫(20-25℃)放置15-30分鐘。實(shí)驗(yàn)過(guò)程應(yīng)在室溫(20-25℃)內(nèi)進(jìn)行。
2、 取出酶標(biāo)板,按照標(biāo)準(zhǔn)品的次序分別加入50μl的標(biāo)準(zhǔn)品溶液于空白微孔中。
3、空白微孔中加入50μl的樣品,空白對(duì)照加入50μl的蒸餾水;
4、 在樣品孔中加入10μl的生物素;(不含空白對(duì)照孔,切忌:生物素只加樣品孔!)
5、在各孔中加入100μl的酶標(biāo)記溶液;(不含空白對(duì)照孔)
6、將酶標(biāo)板用封口膠密封后,37℃孵育反應(yīng) 1小時(shí);(在孵育箱中保持穩(wěn)定的溫度與濕度)
7、 充分清洗酶標(biāo)板3-5次,保持各孔有充足的水壓;(濃縮洗滌液以1:100的比例與蒸餾水稀釋)
8、酶標(biāo)板洗滌后用吸水紙*拍干;
9、各孔加入顯色劑A、B液各50μl;(不含空白對(duì)照孔)
10、各孔加入50μl終止液,終止反應(yīng);10、20-25℃下避光反應(yīng)15分鐘;

結(jié)果判斷
1、30分鐘內(nèi)在波長(zhǎng)450nm的酶標(biāo)儀上讀取各孔的OD值;
2、以O(shè)D值為縱坐標(biāo),以標(biāo)準(zhǔn)品的濃度為橫坐標(biāo),繪制曲線圖;
3、根據(jù)樣品的OD值查找對(duì)應(yīng)的濃度范圍;
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