elisa實(shí)驗(yàn)中是以抗原和抗體的免疫反應(yīng)為基礎(chǔ)，ELISA試劑以及各種溶液如何配置?zui近剛做了下ELISA實(shí)驗(yàn)，把各種ELISA配置方法總?cè)缦拢?1) ELISA實(shí)驗(yàn)包被緩沖液(2) ELISA實(shí)驗(yàn)洗滌緩沖液(2) ELISA實(shí)驗(yàn)洗滌緩沖液(3) ELISA實(shí)驗(yàn)稀釋液;(4)ELISA實(shí)驗(yàn)終止液(5)ELISA底物緩沖液(6)ELISA實(shí)驗(yàn)TMB(四甲基聯(lián)苯胺)使用液(7) ELISA實(shí)驗(yàn)ABTS使用液(8)ELISC。

試劑

(1) ELISA實(shí)驗(yàn)包被緩沖液(PH9.6 0.05M碳酸鹽緩沖液):

NaHCO3    1.59克

NaHCO3 2.93克

加蒸餾水至1000ml

(2) ELISA實(shí)驗(yàn)洗滌緩沖液(PH7.4 PBS)：0.15M

KH2PO4   0.2克

Na2HPO4·12H2O 2.9克

NaCl   8.0克

KCl 0.2克

Tween-20 0.05%  0.5ml

加蒸餾水至1000ml

(3) ELISA實(shí)驗(yàn)稀釋液：

牛血清白蛋白(BSA) 0.1克

加洗滌緩沖液至100ml

或以羊血清、兔血清等血清與洗滌液配成5～10%使用。

(4) ELISA實(shí)驗(yàn)終止液(2M H2SO4)：

蒸餾水178.3ml，逐滴加入濃硫酸(98%)21.7ml。

(5) ELISA底物緩沖液(PH5.0磷酸棗檸檬酸):

0.2M Na2HPO4(28.4克/L)       25.7ml

0.1M 檸檬酸(19.2克/L) 24.3ml

加蒸餾水50ml。

(6) ELISA實(shí)驗(yàn)TMB(四甲基聯(lián)苯胺)使用液:

TMB(10mg/5ml無水乙醇)   0.5ml

底物緩沖液(PH5.5)   10ml

0.75%H2O2             32μl

(7) ELISA實(shí)驗(yàn)ABTS使用液:

ABTS 0.5mg

底物緩沖液(PH5.5)    1ml

3%H2O2               2μl

(8)ELISA實(shí)驗(yàn)封閉液：

牛血清白蛋白(BSA) 5克

加洗滌緩沖液至100ml。

值得一提的是有的封閉液中含有脫脂奶粉，不適合長期保存。

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為了保證ELISA實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性，實(shí)驗(yàn)操作中加入的緩沖液和各組分一定要，將洗滌液加入酶標(biāo)板中的時候防止加入的試劑混入另外一個酶標(biāo)孔，嚴(yán)防交叉污染。

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