免疫酶標(biāo)方法有四種分別是：直接法、間接法、PAP法和雙PAP法，詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)操作步驟如下：

一、直接法
1．標(biāo)本固定。
2．PBS洗滌2×3分鐘。
3．1% H2O2（或1% H2O2 甲醇）抑制內(nèi)源性過氧化物，室溫10～20分鐘。
4．正常血清（1:10）孵育，室溫20分鐘。
5．滴加酶標(biāo)記的抗體37℃1小時(shí)或4℃過夜。
6．PBS洗滌3×3分鐘。
7．DAB＋H2O2顯色5～10分鐘，鏡下控制染色結(jié)果。DAB＋H2O2應(yīng)用提前15分鐘配制。
8．充分水洗后，復(fù)染、脫水、透明、封片、鏡檢。
二、間接法
1．標(biāo)本固定。
2．PBS洗滌2×3分鐘。
3．1% H2O2（或1% H2O2 甲醇）抑制內(nèi)源性過氧化物，室溫10～20分鐘。
4．正常血清（1:10）孵育，室溫20分鐘。
5．滴加*抗體，37℃1小時(shí)或4℃過夜。
6．PBS洗滌3×3分鐘。
7．滴加酶標(biāo)二抗，室溫1小時(shí)。
8．PBS洗滌3×3分鐘。
9．0.04%DAB＋0.03 %H2O2顯色5～10分鐘。
10． 充分水洗后，復(fù)染、脫水、透明、封片、鏡檢。
三、PAP法（過氧化物酶抗過氧化物酶抗體復(fù)合物法）
1．標(biāo)定固定后，PBS洗滌。
2．1% H2O2（或1% H2O2甲醇）阻斷內(nèi)源性過氧化物，室溫10～20分鐘。
3．PBS洗滌2×3分鐘。
4．正常血清（二抗的正常血清）孵育，室溫20分鐘。
5．滴加一抗，室溫1小時(shí)或4℃過夜。
6．PBS洗滌3×3分鐘。
7．滴加二抗，室溫30分鐘。
8．PBS洗滌3×3分鐘。
9．加PAP復(fù)合物，室溫60分鐘。
10．PBS洗滌3×3分鐘。
11．0.04%DAB＋0.03 %H2O2顯色5～10分鐘。
12．充分水洗。
13．蘇木精復(fù)染，封片觀察。
四、雙PAP法
1-10．同單PAP法。
11．二次加酶標(biāo)二抗。
12．PBS洗。
13．二次加PAP。
14．PBS洗。
15．0.04%DAB＋0.03 %H2O2顯色5～10分鐘。
16．蘇木精復(fù)染核，封片，鏡檢。

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