亚洲精品中文视频,在线观看aaa,丁香五月欧美成人,亚洲成人高清,成人免费观看视频在线观看,在线日韩中文,成人av免费播放

深圳子科生物科技有限公司
免費(fèi)會員
ELISA試劑盒
農(nóng)殘類ELISA檢測試劑盒
免疫組化
美國BioAssay Systems
美國OMEGA
蛋白分子學(xué)試劑
菌株
日本W(wǎng)AKO
進(jìn)口Enzo Life Sciences
標(biāo)準(zhǔn)品對照品
生物培養(yǎng)基
原位雜交試劑盒
生化試劑
生化法試劑盒

培養(yǎng)基的制備與滅菌

時間:2016/6/12閱讀:649
分享:

一、實驗?zāi)康呐c要求:
(1) 熟悉玻璃器皿的洗滌包裝和滅菌前的準(zhǔn)備工作。
(2) 學(xué)習(xí)微生物培養(yǎng)基和無菌水的制備,了解培養(yǎng)基配方中各成分的作用、制備流程及各環(huán)節(jié)的操作技術(shù)與應(yīng)用。
(3) 學(xué)習(xí)并掌握培養(yǎng)基的高壓蒸氣滅菌原理、操作關(guān)鍵技術(shù)和滅菌技術(shù)。
二、實驗原理
培養(yǎng)基的制備原理
培養(yǎng)基是按照微生物生長發(fā)育的需要,用不同組分的營養(yǎng)物質(zhì)調(diào)制而成的營養(yǎng)基質(zhì)。人工制備培養(yǎng)基的目的,在于給微生物創(chuàng)造一個良好的營養(yǎng)條件。把一定的培養(yǎng)基放入一定的器皿中,就提供了人工繁殖微生物的環(huán)境和場所。自然界中,微生物種類繁多,由于微生物具有不同的營養(yǎng)類型,對營養(yǎng)物質(zhì)的要求也各不相同,加之實驗和研究上的目的不同,所以培養(yǎng)基在組成原料上也各有差異。但是,不同種類和不同組成的培養(yǎng)基中,均應(yīng)含有滿足微生物生長發(fā)育的水分、碳源、氮源、無機(jī)鹽和生長素以及某些特需的微量元素等。此外,培養(yǎng)基還應(yīng)具有適宜的酸堿度(pH值)和一定緩沖能力及一定的氧化還原電位和合適的滲透壓。
根據(jù)制備培養(yǎng)基對所選用的營養(yǎng)物質(zhì)的來源,可將培養(yǎng)基分為天然培養(yǎng)基、半合成培養(yǎng)基和合成培養(yǎng)基三類。按照培養(yǎng)基的形態(tài)可將培養(yǎng)基分為液體培養(yǎng)基和固體培養(yǎng)基。根據(jù)培養(yǎng)基使用目的,可將培養(yǎng)基分為選擇培養(yǎng)基、加富培養(yǎng)基及鑒別培養(yǎng)基等。
培養(yǎng)基的類型和種類是多種多樣的,必須根據(jù)不同的微生物和不同的目的進(jìn)行選擇配制,本實驗分別配制常用培養(yǎng)細(xì)菌、放線菌和真菌的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基、高氏一號合成培養(yǎng)基和馬鈴薯蔗糖培養(yǎng)基等固體培養(yǎng)基。
固體培養(yǎng)基是在液體培養(yǎng)基中添加凝固劑制成的,常用的凝固劑有瓊脂、明膠和硅酸鈉,其中以瓊脂zui為常用,其主要成份為多糖類物質(zhì),性質(zhì)較穩(wěn)定,一般微生物不能分解,故用凝固劑而不致引起化學(xué)成份變化。瓊脂在95℃的熱水中才開始融化,融化后的瓊脂冷卻到45℃才重新凝固。因此用瓊脂制成的固體培養(yǎng)基在一般微生物的培養(yǎng)溫度范圍內(nèi)(25℃-37℃)不會融化而保持固體狀態(tài)。
高壓蒸氣滅菌原理
高壓蒸汽滅菌是將待滅菌的物品放在一個密閉的加壓滅菌鍋內(nèi),通過加熱,使滅菌鍋隔套間的水沸騰而產(chǎn)生蒸汽。待水蒸汽急劇地將鍋內(nèi)的冷空氣從排氣閥中驅(qū)盡,然后關(guān)閉排氣閥,繼續(xù)加熱,此時由于蒸汽不能溢出,而增加了滅菌器內(nèi)的壓力,從而使沸點(diǎn)增高,得到高于100℃的溫度。導(dǎo)致菌體蛋白質(zhì)凝固變性而達(dá)到滅菌的目的。
在同一溫度下,濕熱的殺菌效力比干熱大,其原因有三:一是濕熱中細(xì)菌菌體吸收水分,蛋白質(zhì)較易凝固,因蛋白質(zhì)含水量增加,所需凝固溫度降低(表Ⅴ-2),二是濕熱的穿透力比干熱大(表Ⅴ-3);三是濕熱的蒸汽有潛熱存在,每1克水在100℃時,由氣態(tài)變?yōu)橐簯B(tài)時可放出2.26kJ(千焦)的熱量。這種潛熱,能迅速提高被滅菌物體的溫度,從而增加滅菌效力。
表Ⅴ-2 蛋白質(zhì)含水量與凝固所需溫度的關(guān)系

卵自蛋白含水量(%)

30分鐘內(nèi)凝固所需溫度(℃)

50

25

18

6

0

56

74-80

80-90

145

160-170

 

表Ⅴ-3 干熱與濕熱穿透力及滅菌效果比較

溫 度 (℃)

 

時間(小時)

 

透過布層的溫度(℃)

 

滅 菌

 

20層

 

40層

 

100層

 

干熱 130-140

4

 

86

 

72

 

70.5

 

不*

 

濕熱 105.3

3

 

10l

 

10l

 

10l

 

完 全

 

在使用高壓蒸汽滅菌鍋滅菌時,滅菌鍋內(nèi)冷空氣的排除是否*極為重要,因為空氣膨脹壓大于水蒸汽的膨脹壓,所以,當(dāng)水蒸汽中含有空氣時,在同一壓力下,含空氣蒸汽的溫度低于飽和蒸汽的溫度。滅菌鍋內(nèi)留有不同分量空氣時,壓力與溫度的關(guān)系見表Ⅴ-4。一般培養(yǎng)基用1.05kg/cm2,121.3℃ 15-30分鐘可達(dá)到*滅菌的目的。滅菌的溫度及維持的時間隨滅菌物品的性質(zhì)和容量等具體情況而有所改變。例如含糖培養(yǎng)基用0.56kg/cm2(8磅/英寸2),112.6℃滅菌15分鐘,但為了保證效果,可將其他成分先行121.3℃,20分鐘滅菌,然后以無菌操作手續(xù)加入滅菌的糖溶液。又如盛于試管內(nèi)的培養(yǎng)基以1.05kg/cm2,121.3℃滅菌20分鐘即可,而盛于大瓶內(nèi)的培養(yǎng)基以1.05kg/cm2滅菌30分鐘。

表Ⅴ-4滅菌鍋內(nèi)留有不同分量空氣時,壓力與溫度的關(guān)系

壓 力 數(shù)

 

全部空氣排出時的溫度 (℃)

 

2/3空氣排出時的溫度

 

(℃)

 

l/2空氣排出時的溫度 (℃)

 

1/3空氣排出時的溫度 (℃)

 

空氣全不排出時的溫度 (℃)

 

千克

 

(公斤/ 厘米2)

 

(kg/cm2)

 

磅/英寸2

 

(1b/in2)

 

0.35

 

0.70

 

1.05

 

1.40

 

1.75

 

2.10

 

5

10

 

15

 

20

 

25

 

30

 

108.8

 

115.6

 

121.3

 

126.2

 

130.0

 

134.6

 

100

 

109

 

115

 

121

 

126

 

130

 

94

 

105

 

112

 

118

 

124

 

128

 

90

 

100

 

109

 

115

 

121

 

126

 

72

 

90

 

100

 

109

 

115

 

121

 

 

蒸汽壓力所用單位為kg/cm2(千克/厘米2),它與1b/in2(磅/英寸2)和溫度的換算關(guān)系見表Ⅴ-5。

表Ⅴ-5 蒸汽壓力與蒸汽溫度換算關(guān)系

蒸汽壓力

 

大氣壓

 

壓 力 表 讀 數(shù)

 

蒸汽溫度

 

kg/cm2

 

1b/in2

 

1.00

 

1.25

 

1.50

 

1.75

 

2.00

 

2.50

 

3.00

 

0.00

 

0.25

 

0.50

 

0.75

 

1.00

 

1.50

 

2.00

 

0.00

 

3.75

 

7.50

 

11.25

 

15.00

 

22.50

 

30.00

 

100.0

 

107.0

 

112.0

 

115.0

 

121.0

 

128.0

 

134.5

 

三、實驗器材

1、 藥品 瓊脂,10%HCL,10% NaOH,牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的配方藥品;

2、 材料 具刻度1000毫升塘瓷盅或小鋁鍋,電子稱,10×200mm試管,量筒,小燒杯,玻璃棒,骨匙,pH試紙,分裝漏斗,試管盒,紗布,棉花,報紙,麻繩,標(biāo)簽,培養(yǎng)皿。

3、 設(shè)備 高壓蒸汽滅菌鍋、烘箱、冰箱、電爐等

四、實驗步驟

1、 稱取藥品放在大燒杯中,加入蒸餾水用玻璃棒攪拌并加熱溶化,等藥品溶解后用pH試紙調(diào)節(jié)p H至7.4-7.6,如有沉淀應(yīng)過濾后分裝,每支試管約加入9ml。每組分裝30支,加上棉塞,包上牛皮紙,準(zhǔn)備滅菌。

裝入試管中的量不宜超過試管高度的1/5,裝入三角燒瓶中的量以燒瓶總體積的一半為限。在分裝過程中,應(yīng)注意勿使培養(yǎng)基沾污管口或瓶口、以免弄濕棉塞,造成污染。

2、無菌水準(zhǔn)備

在試管或瓶內(nèi)先盛以適量的蒸餾水〔或理鹽水O.85%NaCl),蓋好棉塞,包上牛皮紙使其滅菌后,其水量恰為9ml。 每組準(zhǔn)備10支與牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基可放在同一試管架上,以一大張牛皮紙包扎寫上姓名。準(zhǔn)備滅菌。

3、高壓滅菌

手提式高壓蒸汽滅菌鍋的使用操作步驟:

(1)首先將內(nèi)層滅菌桶取出,再向外層鍋內(nèi)加入適量的水,使水面與三角擱架相平為宜。

(2)放回滅菌桶,并裝入待滅菌物品。注意不要裝得太擠,以免防礙蒸汽流通而影響滅菌效果。三角燒瓶與試管口端均不要與桶壁接觸,以免冷凝水淋濕包口的紙而透入棉塞。

(3)加蓋,并將蓋上的排氣軟管插入內(nèi)層滅菌桶的排氣槽內(nèi)。再以兩兩對稱的方式同時旋緊相對的兩個螺栓,使螺栓松緊一致,勿使漏氣。

(4)用電爐或煤氣加熱,并同時打開排氣閥,使水沸騰以排除渦內(nèi)的冷空氣。待冷空氣*排盡后,關(guān)上排氣閥,讓鍋內(nèi)的溫度隨蒸汽壓力增加而逐漸上升。當(dāng)鍋內(nèi)壓力升到所需壓力時,控制熱源,維持壓力至所需時間。本實驗用1.05kg/cm2,121.3℃,20分鐘滅菌。

(5)滅菌所需時間到后,切斷電源或關(guān)閉煤氣,讓滅菌鍋內(nèi)溫度自然下降,當(dāng)壓力表的壓力降至0時,打開排氣閥,旋松螺栓,打開蓋子,取出滅菌物品。如果壓力未降到0時,打開排氣閥,就會因鍋內(nèi)壓力突然下降,使容器內(nèi)的培養(yǎng)基由于內(nèi)外壓力不平衡而沖出燒瓶口或試管口,造成棉塞沾染培養(yǎng)基而發(fā)生污染。

(6)將取出的滅菌培養(yǎng)基放入37℃溫箱培養(yǎng)24小時,經(jīng)檢查若無雜菌生長,即可待用。

深圳子科生物微生物組技術(shù)整理編輯!

會員登錄

×

請輸入賬號

請輸入密碼

=

請輸驗證碼

收藏該商鋪

X
該信息已收藏!
標(biāo)簽:
保存成功

(空格分隔,最多3個,單個標(biāo)簽最多10個字符)

常用:

提示

X
您的留言已提交成功!我們將在第一時間回復(fù)您~
在線留言