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上海莼試生物技術(shù)有限公司
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探針濃度對原位雜交反應(yīng)速度的影響

時(shí)間:2015/7/22閱讀:334
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    探針濃度
    探針濃度的高低將影響雜交反應(yīng)的速度。探針濃度低雜交反應(yīng)進(jìn)行得緩慢,反之則進(jìn)行得快。在原位雜交反應(yīng)中,探針濃度遠(yuǎn)比組織中靶核酸濃度要高。zui適宜的探針濃度應(yīng)能獲得zui強(qiáng)的雜交信號和zui低的背景。探針在不同組織上,ELISA試劑盒或在用不同方法制備的標(biāo)本上彌散和穿透情況不同,因而所需要的zui適宜濃度可能也有差別。zui適宜的探針濃度要通過預(yù)實(shí)驗(yàn)確定,一般為0.5~5.0ug/ml,通常建議放射性核素探針濃度為0.5ug/ml,非放射性探針為2ug/ml。此外,雜交液的量也要適當(dāng),一般以每張切片10~20ul為宜。雜交液過多不僅造成浪費(fèi),而且過量的雜交液含核酸探針濃度過高,反而導(dǎo)致高背景染色等不良反應(yīng)。
   

    雜交溫度和時(shí)間
    雜交溫度應(yīng)低于雜交體的熔解或解鏈溫度(Tm)20―30℃,大約在30~60℃之間,因?yàn)樵谏鲜鰷囟葪l件下進(jìn)行雜交反應(yīng),雜交率zui高。在實(shí)際操作中,雜交溫度的選擇是:當(dāng)雜交液中的甲酰胺濃度為50%,鹽濃度為0.75mol/L時(shí),DNA探針的雜交溫度為42℃左右,RNA探針雜交溫度為50~55℃,寡核苷酸探針的雜交溫度為37℃左右。在實(shí)驗(yàn)中需要根據(jù)具體情況摸索*雜交溫度。ELISA試劑盒

    雜交反應(yīng)時(shí)間可能隨探針濃度的增加而縮短,但在一個相當(dāng)大的濃度范圍內(nèi),雜交反應(yīng)在4―6小時(shí)內(nèi)完成。在實(shí)際操作中,一般將雜交時(shí)間定為16~20小時(shí),或?yàn)榱朔奖?,將雜交液和標(biāo)本孵育過夜。然而,雜交反應(yīng)時(shí)間不要超過24小時(shí),反應(yīng)時(shí)間過長,形成的雜交體會解鏈,雜交信號反而會減弱。

英文名稱 Rattus norvegicus (Rat) 白介素9(IL9)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 規(guī)格: 48T/96T
英文名稱 Rhesus monkey (Simian) 白介素9(IL9)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 規(guī)格: 48T/96T
英文名稱 Rattus norvegicus (Rat) 白介素8受體β(IL8Rβ)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 規(guī)格: 48T/96T
英文名稱 Homo sapiens (Human) 白介素8受體β(IL8Rβ)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 規(guī)格: 48T/96T
英文名稱 Mus musculus (Mouse) 白介素8受體β(IL8Rβ)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 規(guī)格: 48T/96T
英文名稱 Homo sapiens (Human) 白介素8受體α(IL8Rα)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 規(guī)格: 48T/96T
英文名稱 Mus musculus (Mouse) 白介素8受體α(IL8Rα)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 規(guī)格: 48T/96T
英文名稱 Oryctolagus cuniculus (Rabbit) 白介素8受體α(IL8Rα)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 規(guī)格: 48T/96T
ELISA試劑盒英文名稱 Rattus norvegicus (Rat) 白介素8受體α(IL8Rα)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 規(guī)格: 48T/96T
英文名稱 Homo sapiens (Human) 白介素8(IL8)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 規(guī)格: 48T/96T
英文名稱 Sus scrofa; Porcine (Pig) 白介素8(IL8)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 規(guī)格: 48T/96T

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