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上海莼試生物技術(shù)有限公司
初級(jí)會(huì)員 | 第2年

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動(dòng)物臟器粉末吸收法消除非特異性染色

時(shí)間:2015/7/8閱讀:401
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動(dòng)物臟器粉末吸收法
常用肝粉(豬、大白鼠或小白鼠),其次是骨髓粉、鼠腦粉和雞胚粉等。每毫升熒光抗體中加入肝粉50~100mg,在離心管中充分混勻,在室溫中振動(dòng)2h,4℃中過(guò)夜,再攪拌10min,高速離心(3000~15000r/min)30min,1~2次后,即可使用其上清液。吸收一般應(yīng)在臨用前進(jìn)行,吸收后之熒光抗體保存冰箱中勿超過(guò)2周。染色應(yīng)作吸收前后之比較,吸收時(shí)可先用緩沖鹽水將組織干粉浸濕,離心(3000~15000r/min)30min,除去上清液,再加入熒光抗體進(jìn)行吸收,以免消耗過(guò)多的抗體。
肝粉或新鮮細(xì)胞吸收是一種非特異性的消除方法,對(duì)熒光抗體的熒光色素和蛋白都有吸附作用。如檢查組織中的病毒抗原時(shí),也可用相同的組織干粉或勻漿沉淀物吸收之。
用臟器肝粉吸收對(duì)熒光抗體損失較多,如果根據(jù)Hiramotos氏等的方法將組織的20%生理鹽水勻漿液,用生理鹽水洗2~3次,12000r/min
10min離心沉淀,用其沉淀物吸收其熒光抗體即能*達(dá)到目的,京極方久氏認(rèn)為這樣吸收對(duì)熒光抗體幾乎沒(méi)有損失,他們常用此法,效果甚佳,吸收后放置一周左右,用時(shí)有必要再吸收一次。

【肝粉的制法】
(1)將若干只小白鼠或大白鼠放血?dú)⑺?,取出肝臟,用生理鹽水洗2~3次,除去血液,剝掉表面的結(jié)締組織的脂肪。
(2)剪碎,用生理鹽水反復(fù)洗滌至無(wú)血色止,然后再加生理鹽水少許,用組織搗碎機(jī)或勻漿器作成勻漿。
(3)將肝勻漿裝入離心管內(nèi)(1/3左右),交換地用2~3倍量生理鹽水和丙酮反復(fù)洗滌各三次,至上清無(wú)血色止,每次完畢先用2000r/min離心沉淀15 min后,再除去上清液。
(4)zui后用丙酮洗滌肝漿,再用布氏漏斗過(guò)濾,或離心沉淀,將沉淀物平鋪在潔凈的玻璃板上,37℃烤干(過(guò)夜)。
(5)在乳缽中充分研磨,用120目銅篩篩選過(guò)后,分裝,密封,低溫干燥保存。

 

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