大鼠結(jié)締組織生長因子elisa試劑盒實驗說明書

實驗原理
　　本大鼠結(jié)締組織生長因子試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標本中大鼠結(jié)締組織生長因子（CTGF）水平。用純化的大鼠結(jié)締組織生長因子（CTGF）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入大鼠結(jié)締組織生長因子（CTGF），再與HRP標記的結(jié)締組織生長因子（CTGF）抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標抗體復(fù)合物，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的結(jié)締組織生長因子（CTGF）呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標準曲線計算樣品中大鼠結(jié)締組織生長因子（CTGF）濃度。 

大鼠結(jié)締組織生長因子試劑盒組成 
1 20倍濃縮洗滌液 20ml×1瓶 7 終止液 3ml×1瓶
2 酶標試劑 3ml×1瓶 8 標準品（4000 ng/L） 0.5ml×1瓶
3 酶標包被板 12孔×4條 9 標準品稀釋液 1.5ml×1瓶
4 樣品稀釋液 3ml×1瓶 10 說明書 1份
5 顯色劑A液 3ml×1瓶 11 封板膜 2張 
6 顯色劑B液 3ml×1/瓶 12 密封袋 1個

標本要求 
1．大鼠結(jié)締組織生長因子標本采集后盡早進行提取，提取按相關(guān)文獻進行，提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融
2．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

操作步驟
標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。

加樣：大鼠結(jié)締組織生長因子分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品zui終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。 
配液：將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用
洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。
加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。 
溫育：操作同3。
洗滌：操作同5。
顯色：大鼠結(jié)締組織生長因子每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.
終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）。
測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。

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